Cre-LoxP是基因功能研究中应用最广泛的条件性基因表达调节系统,组织/细胞特异性启动子驱动的Cre工具鼠与携带LoxP位点的目的基因floxed小鼠交配后,Cre介导的位点特异性重组可导致靶基因在特定细胞类型中被条件性敲除或敲入。诱导型Cre工具模型的出现,使得对基因表达的时空双重调控成为现实。
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赛业生物提供数百种工具鼠模型,可广泛应用于免疫系统、神经系统、胃肠道及肝脏等多组织多器官的重组酶活性验证研究。免疫细胞的发育始于骨髓造血干细胞(HSCs),其多向分化过程受级联性细胞因子(如CSFs和ILs家族)的严格调控。不同谱系免疫细胞的鉴定依赖于特征性表面标志物(如CD分子谱)及关键转录因子的表达模式。基于此,构建免疫细胞特异性Cre工具鼠的核心策略是利用其特异性分子标记或转录因子的启动子来调控Cre的表达,这种设计为免疫细胞亚群的功能研究提供了遗传学基础。
免疫细胞特异性Cre工具模型
Cre重组酶结合荧光报告基因可进一步实现对特定细胞的荧光标记和谱系示踪,赛业生物可提供携带报告基因的免疫细胞特异性工具模型,可直接对某一类免疫细胞进行追踪
免疫细胞荧光标记工具模型
实际案例数据
例:Mb1-iCre小鼠(产品编号:C001552)
图1 外周血、脾脏和骨髓中淋巴B细胞(mCD45+mCD19+)的Cre重组酶表达情况
将Mb1-iCre小鼠与条件性表达tdTomato荧光蛋白的ROSA26-LSL-tdTomato小鼠交配,采集子代小鼠的外周血、脾脏和骨髓组织,通过流式细胞荧光分选技术(FACS)检测tdTomato蛋白的表达情况。FACS结果显示在Cre+小鼠(Mb1-iCre[KI/+];ROSA26-LSL-tdTomato[CKI/+])的外周血淋巴B细胞中存在极强的tdTomato表达,淋巴B细胞的重组效率在98%以上;脾脏淋巴B细胞的重组效率在80%左右;骨髓淋巴B细胞的重组效率在76.93%~80.66%之间。
例:Cx3cr1-iCre小鼠(产品编号:C001391)
图2 脑部、肺部、肠道、肾脏和肝脏的Cre重组酶表达情况
将Cx3cr1-iCre小鼠与Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配,采集子代小鼠的脑、肺、肠道、肾脏和肝脏等组织,使用小胶质细胞标记物IBA1抗体和Tomato红色荧光抗体共定位,最终可确认Cre重组酶主要定位于脑组织小胶质细胞中。此外,在肺部、肾脏、肝脏和肠道的部分组织中检测到tdTomato蛋白红色荧光,表明在这些部位存在Cre重组酶表达,表达的细胞可能为巨噬细胞。
例:H11-Vav1-iCre小鼠(产品编号:C001357)
图3 外周血、脾脏及骨髓的Cre重组酶表达情况
将H11-Vav1-iCre与Rosa26-LSL-tdTomato小鼠配种,产生双基因杂合子代小鼠。采集子代小鼠外周血、脾脏及骨髓,通过流式观察荧光发生情况。最终检测结果,在骨髓及脾脏的造血干细胞中检测到强烈的tdTomato重组荧光。