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基因敲入小鼠

基因敲入小鼠是指通过基因工程的方法在目的基因位置引入特定的突变或外源基因的小鼠模型,通常包括片段敲入小鼠、点突变小鼠、条件性敲入小鼠和人源化小鼠。赛业生物采用TurboKnockout基因编辑技术,可高效制作各类基因敲入小鼠。
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基因敲入小鼠

基因敲入小鼠

基因敲入可以在目的基因位置引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型); 或将报告基因(如EGFP,mRFP,mCherry,mYFP,或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达。也可以用报告基因取代小鼠本身的基因,使KO/KI同时发生。主要用于药物筛选相、信号通路、示踪相关研究。

基因敲入小鼠示意图

TurboKnockout基因敲入小鼠建系原则与流程

1. 去除抗性基因Neo:选择阳性TurboKnockout KI小鼠与野生型小鼠杂交,自删除Neo,获得去除打靶载体中的Neo基因的杂合子F1代小鼠。

2. 再挑选一对杂合子F1代小鼠进行自交:通过PCR鉴定筛选得到F2代纯合子KI小鼠。

TurboKnockout基因敲入小鼠建系流程图

条件性基因敲入小鼠

条件性基因敲入小鼠是指将重组酶系统或者诱导系统导入基因位置,可以实现条件性敲入的目的从而控制基因的表达。TurboKnockout条件性基因敲入小鼠是通过同源重组将重组酶系统或者诱导系统导入到目的基因位置,通过不同的重组酶或者诱导剂的作用而达到条件性敲入的目的,独有的 TurboKnockout®技术可以使小鼠的构建周期缩短为4个月。

条件性基因敲入小鼠示意图

TurboKnockout条件性基因敲入小鼠建系原则与流程

1. F0代与野生型交配:将F0代阳性雄鼠(Founder)与野生型雌鼠(WT)进行交配,筛选获得Neo去除的F1代(CKI/+)小鼠。

2. F1代自交与杂交:将一部分F1代(CKI/+)小鼠进行自交,获得F2代(CKI/CKI)小鼠;将另一部分F1代(CKI/+)小鼠与组织特异性(或诱导型)表达Cre工具鼠交配,获得F2代(CKI/+, Cre)小鼠。

3. F2代交配:将F2代(CKI/CKI)小鼠与(CKI/+, Cre)小鼠交配,获得组织特异性(或诱导型)基因敲入小鼠(CKI/CKI, Cre)小鼠。

条件性基因敲入小鼠建系流程图

人源化小鼠

人源化小鼠是一种实验动物模型,通过基因编辑技术将人类基因、细胞或组织移植到小鼠体内,使得小鼠表现出类似人类的特征或功能。这种模型被广泛用于生物医学研究,特别是用于研究人类疾病的发病机制、药物研发以及治疗方法的评估。人源化小鼠能够提供更接近人类生理和疾病特征的模拟,有助于加深对疾病机制的理解,加速新药的开发和临床应用。

小鼠人源化程度的选择取决于研究的问题和目的,我们可以只进行密码子、域、外显子、编码区的人源化,也可以进行所有区域(包括内含子和侧翼调控区)的人源化。迄今为止,文献中大多数基因组人源化小鼠都有编码序列的小规模改变,而这导致了人-小鼠嵌合蛋白的产生,并促进了对蛋白质生化关键领域的研究。然而,越来越多的对遗传病的基因治疗研究需要使用包含完整人类遗传背景的全人源化小鼠模型,特别在靶向基因组的治疗方案中。

人源化小鼠示意图

基因敲入小鼠定制服务流程

1
需求沟通

专业技术顾问团队与您详细沟通定制需求,包括定制类型、具体基因以及交付情况等内容,确保精准理解您的研究目标。

2
确定方案

专业技术团队针对您的定制需求进行个性化项目分析,制定专属实施方案,并与您沟通确认,敲定最终执行细节。

3
合同签订

方案确认后,双方签订定制服务合同,明确权责、周期与交付标准,正式启动项目。

4
项目执行

团队严格按照确定的分析方案及合同内容,推进基因敲入小鼠模型的构建工作。

5
定期汇报

技术顾问会根据您的需求,定期向您同步项目进展,确保您随时掌握项目动态。

6
模型交付

项目达到预定要求后,我们将提前通知您,完成模型交付的准备工作。

7
项目完成

模型交付完成后,我们会出具项目结题报告,并提供小鼠后续饲养、繁育及鉴定建议。

TurboKnockout®基因编辑:跨越"嵌合体"阶段且自删除Neo,减少两代繁育时间

基于ES打靶技术的TurboKnockout技术采用了独特的建系和基因改造技术,建立了具有高效遗传优势的TurboKnockout ES细胞系,通过特定胚胎发育阶段的显微注射,使TurboKnockout ES细胞100%代替内源ES细胞,从而实现跨越"嵌合体"阶段,把ES打靶构建周期缩短至快至4个月。且TurboKnockout采用独特的Self-deleting Neo Cassette,所获得的TurboKnockout小鼠与任何品系小鼠交配,都可以100%自删除Neo。即TurboKnockout不仅实现跨越"嵌合体"阶段,还能真正自删除Neo,从而快速获得去除Neo的杂合子小鼠。

TurboKnockout技术优势

TurboKnockout基因编辑技术优势

独立自主知识产权

TurboKnockout技术无专利纠纷困扰,是涉及新药研发项目的常用技术。

可进行大片段基因编辑

可胜任复杂的基因修饰,实现Mb级敲入及敲除,单次最大可敲入350kb的序列,ES细胞可耐受至多7轮打靶仍具有生殖系遗传,如构建全基因组人源化小鼠和人源化抗体小鼠。

无脱靶效应

TurboKnockout技术建立在传统ES打靶技术之上,没有脱靶效应,可通过PCR、染色体核型、southern blot检测,流式细胞术、RT-qPCR、WB等方式在细胞阶段进行项目表达检测,基因修饰准确、效果稳定。

周期更短

实现跨越"嵌合体"阶段且自删除Neo,减少两代繁育时间,构建周期快至4个月,同时,TurboKnockout可在ES水平做多步BAC重组,进一步缩短服务周期。

批量获得纯合子模型

优化的纯合ES克隆筛选系统结合囊胚前注射或四倍体补偿技术,可5个月批量获得纯合基因编辑小鼠。

品系选择灵活

赛业生物可提供C57BL/6NCya,C57BL/6JCya,BALB/cAnCya,129S2/SvPasCya等多品系选择。

基因敲入小鼠服务案例文献精选

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