Logo

商城
CN
Cover
基因敲入小鼠
基因敲入小鼠是指通过基因工程的方法在目的基因位置引入特定的突变或外源基因的小鼠模型,通常包括片段敲入小鼠、点突变小鼠、条件性敲入小鼠和人源化小鼠。赛业生物可采用TurboKnockout®基因打靶技术和CRISPR-Pro基因编辑技术制作基因敲入小鼠。

基因敲入小鼠

基因敲入小鼠是指通过基因工程的方法在目的基因位置引入特定的特变或外源基因的小鼠模型。

TurboKnockout®基因敲入小鼠

TurboKnockout®基因敲入小鼠是通过基于ES打靶技术的TurboKnockout®技术,在目的基因位置引⼊特定的突变或外源基因的小鼠模型。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型),或将报告基因(如EGFP,mRFP,mCherry,mYFP,或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达,也可以用报告基因取代小鼠本身的基因,使KO/KI同时发生。
TurboKnockout®基因敲入小鼠建系原则与流程:
1. 去除抗性基因Neo:选择阳性TurboKnockout® KI小鼠与野生型小鼠杂交,自删除Neo,获得去除打靶载体中的Neo基因的杂合子F1代小鼠。
2. 再挑选⼀对杂合子F1代小鼠进行自交,通过PCR鉴定筛选得到F2代纯合子KI小鼠。

CRISPR-Pro基因敲入小鼠

CRISPR-Pro基因敲入小鼠是通过CRISPR-Pro技术在目的基因位置引入特定的突变或外源基因,利用小鼠的表达调控元件指导目的基因表达。例如,将⼀个可视的标记基因(如GFP或lacZ)敲入⼀个基因位点,以取代目标基因的编码序列,达到跟踪该基因表达的目的。或者将⼀个标记或⼀个标签蛋⽩敲入编码序列的末端(少数情况下在前端)来形成⼀个融合蛋白,以达到对目标基因表达和插入位点进行检验的目的。
CRISPR-Pro基因敲入小鼠建系原则与流程:
1. 通过针对靶基因设计、构建gRNA质粒并转录为RNA,再合成含有突变位点信息的donor oligo或donor vector,与Cas蛋白和mRNA⼀起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代小鼠。
2. F0代阳性小鼠与野生型小鼠进行交配,获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子小鼠。
3. 选择来⾃同⼀只F0代小鼠,敲入位点⼀致的F1代阳性小鼠,达到性成熟后进行同胞交配,可获得F2代小鼠。对获得的F2代小鼠进行PCR及测序鉴定,理论上,F2代小鼠中25%为敲入位点⼀致的纯合子小鼠,有50%为只有⼀条染色体敲入的杂合子小鼠,有25%为野生型小鼠。

条件性基因敲入小鼠

条件性基因敲入小鼠是指将重组酶系统或者诱导系统导入基因位置,可以实现条件性敲入的目的从而控制基因的表达。

TurboKnockout®条件性基因敲入小鼠

TurboKnockout®条件性基因敲入小鼠是通过同源重组将重组酶系统或者诱导系统导入到目的基因位置,通过不同的重组酶或者诱导剂的作用而达到条件性敲入的目的,独有的TurboKnockout®技术可以使小鼠的构建周期缩短为4个月。
TurboKnockout®条件性基因敲入小鼠建系原则与流程:
1. 将F0代阳性雄鼠(Founder)与野生型雌鼠(WT)进行交配,筛选获得Neo去除的F1代(CKI/+)小鼠。
2. 将一部分F1代(CKI/+)小鼠进行自交,获得F2代(CKI/CKI)小鼠;将另一部分F1代(CKI/+)小鼠与组织特异性(或诱导型)表达Cre工具鼠交配,获得F2代(CKI/+, Cre)小鼠。
3. 将F2代(CKI/CKI)小鼠与(CKI/+, Cre)小鼠交配,获得组织特异性(或诱导型)基因敲入小鼠(CKI/CKI, Cre)小鼠。

CRISPR-Pro条件性基因敲入小鼠

CRISPR-Pro条件性基因敲入小鼠:通过CRISPR-Pro技术使得DNA双链断裂,进而可以将重组酶系统或者诱导系统特异性的导入到目的基因的位置,在后续加入重组酶或者诱导剂从而达到条件性敲入的目标。
CRISPR-Pro条件性基因敲入小鼠建系原则与流程:
1. 将F0代阳性小鼠(Founder)与野生型小鼠(WT)进行交配,筛选获得F1代(CKI/+)小鼠。
2. 将一部分F1代(CKI/+)小鼠进行自交,获得F2代(CKI/CKI)小鼠;将另一部分F1代(CKI/+)小鼠与组织特异性(或诱导型)表达Cre工具鼠交配,获得F2代(CKI/+, Cre)小鼠。
3. 将F2代(CKI/CKI)小鼠与(CKI/+, Cre)小鼠交配,获得组织特异性(或诱导型)基因敲入小鼠(CKI/CKI, Cre)小鼠。

人源化小鼠

人源化小鼠是一种实验动物模型,通过基因编辑技术将人类基因、细胞或组织移植到小鼠体内,使得小鼠表现出类似人类的特征或功能。这种模型被广泛用于生物医学研究,特别是用于研究人类疾病的发病机制、药物研发以及治疗方法的评估。人源化小鼠能够提供更接近人类生理和疾病特征的模拟,有助于加深对疾病机制的理解,加速新药的开发和临床应用。小鼠人源化程度的选择取决于研究的问题和目的,我们可以只进行密码子、域、外显子、编码区的人源化,也可以进行所有区域(包括内含子和侧翼调控区)的人源化。迄今为止,文献中大多数基因组人源化小鼠都有编码序列的小规模改变,而这导致了人-小鼠嵌合蛋白的产生,并促进了对蛋白质生化关键领域的研究。然而,越来越多的对遗传病的基因治疗研究需要使用包含完整人类遗传背景的全人源化小鼠模型,特别在靶向基因组的治疗方案中。
人源化小鼠由于在模拟人类生理和病理特征方面表现出强相关性,逐步成为疾病研究工具的首选。如果要更深入地研究致病机理,就需要用上长片段甚至全基因组人源化小鼠。为此,赛业生物启动了HUGO-GT®全基因组人源化模型计划,基于自主研发的TurboKnockout®技术,对鼠源基因实现原位替换,成功构建了涵盖更丰富干预靶点的全基因组人源化小鼠。该小鼠搭载了更高效的大片段载体融合技术,可作为万能模板进行针对性的突变定制服务,是更贴近真实世界生物机制的药物临床前研究模型。同时,在HUGO-GT®小鼠的基础上,我们还可以为研究人员提供眼科、神经、肿瘤免疫等疾病研究领域的CRO服务,全面赋能遗传性疾病研究以及基因治疗药物开发。
全人源抗体药物因其高亲和力、高特异性、毒副作用小的特点,克服了动物源抗体及嵌合抗体的诸多缺点,已成为治疗性抗体药物发展的必然趋势。全人源化小鼠产生的全人源抗体具有低免疫原性和高亲和力等特点,且生产灵活,体内抗体成熟过程完整。
基于国内创新性全人抗体药物研发的需求,赛业生物凭借扎实的技术创新实力,基于TurboKnockout®技术,自主开发了HUGO-Ab®全人源化抗体小鼠,能够在体内产生具有高亲和力和低免疫原性的全人源化抗体,极大加快抗体发现和新药研发过程,这一点已经得到了多家跨国药企、生物制药公司、科研学术机构的验证。

基因敲入小鼠服务案例文献精选

A gut-derived hormone regulates cholesterol metabolism.
Cell(2024)Cholesin基因敲入小鼠
Hepatic Zbtb18 (Zinc Finger and BTB Domain Containing 18) alleviates hepatic steatohepatitis via FXR (Farnesoid X Receptor).
Signal Transduction and Targeted Therapy(2024)Zbtb18条件性敲入小鼠
Sex-determining region Y gene promotes liver fibrosis and accounts for sexual dimorphism in its pathophysiology.
Journal of Hepatology(2024)Sry基因敲入小鼠
ECSIT facilitates memory CD8 T cell development by mediating fumarate synthesis during viral infection and tumorigenesis.
Nature cell biology(2024)Ecsit-EGFP报告基因小鼠
N-Acetyltransferase 10 represses Uqcr11 and Uqcrb independently of ac4C modification to promote heart regeneration.
Nature communications(2024)Nat10基因敲入小鼠
Sensory neurons promote immune homeostasis in the lung.
Cell(2023)Jak1条件性敲入小鼠
Disruption of ER ion homeostasis maintained by an ER anion channel CLCC1 contributes to ALS-like pathologies.
Cell Research(2023)Clcc1基因敲入小鼠
Macrophage CARD9 mediates cardiac injury following myocardial infarction through regulation of lipocalin 2 expression.
Signal Transduction and Targeted Therapy(2023)Cd45基因敲入小鼠
MafB-restricted local monocyte proliferation precedes lung interstitial macrophage differentiation.
Nature Immunology(2023)Tmem119基因敲入小鼠
Neuropeptide regulation of non-redundant ILC2 responses at barrier surfaces.
Nature(2022)Nmur1基因敲入小鼠