完全性基因敲除大鼠

完全性基因敲除大鼠是采用基因编辑技术，造成目的基因的功能区域被敲除，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的大鼠模型。赛业生物采用独特的受精卵处理方式使受精卵偏好同源重组修复路径，进而提高同源重组效率，制作周期快至3个月。

建系原则与流程

1. 通过构建打靶载体，并将载体显微注射至受精卵，获得测序鉴定阳性的F0代杂合子大鼠。

2. F0代杂合子大鼠与野生型大鼠进行交配，获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子大鼠。

3. 选择来自同一只F0代大鼠，基因型一致的F1代大鼠，达到性成熟后进行互配，可获得F2代大鼠。对获得的F2代大鼠进行PCR及测序鉴定，理论上，F2代大鼠中25%为纯合子，50%为杂合子，25%为野生大鼠。

条件性基因敲除大鼠

条件性基因敲除大鼠是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出flox大鼠，该flox大鼠在与表达Cre重组酶大鼠杂交之前，该基因表达正常；当flox大鼠与组织特异性表达Cre酶的大鼠进行杂交后，可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因，而在其它组织或细胞中该基因表达正常。

建系原则与流程

1. 与野生型大鼠杂交：阳性大鼠（+/flox）与野生型大鼠（+/+）杂交，获得F1代杂合子大鼠（+/flox）。

2. 挑选一对F1代杂合子大鼠（+/flox）进行自交，获得F2代纯合子大鼠（flox/flox）。

基因敲入大鼠

基因敲入大鼠是利用基因编辑技术，针对靶基因设计、构建相应的引导分子和相关元件引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变（模拟人类遗传疾病模型）或将报告基因（如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等）引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达，也可以用报告基因取代大鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。

建系原则与流程

1. 通过构建打靶载体，并将载体显微注射至受精卵，获得测序鉴定阳性的F0代杂合子大鼠。

2. F0代杂合子大鼠与野生型大鼠进行交配，获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子大鼠。

3. 选择来自同一只F0代大鼠，敲入位点一致的F1代大鼠，达到性成熟后进行同胞交配，可获得F2代大鼠。

4. 对获得的F2代大鼠进行PCR及测序鉴定，理论上，F2代大鼠中25%为敲入位点一致的纯合子大鼠，有50%为只有一条染色体敲入的杂合子大鼠，有25%为野生型大鼠。

转基因大鼠

转基因大鼠制作最常用的一种方法是DNA原核显微注射。DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内，注射DNA整合到大鼠受精卵的基因组中，并稳定遗传给后代。赛业所使用的PiggyBac系统DNA显微注射，制备的转基因鼠基因表达阳性率为常规质粒DNA显微注射的2倍以上！

建系原则与流程

1. 原核显微注射获得PCR阳性F0代杂合子大鼠。原核显微注射导入的目的基因是将目的基因随机整合到大鼠的基因组，首代转基因大鼠（F0）将会有不同的整合位点，整合基因的拷贝数可能在不同的首代转基因大鼠中也不同。因此，每只F0代大鼠需要作为一个独立的谱系研究，并且与其它F0代大鼠分开进行繁殖。

2. F0代大鼠达到性成熟后（8周）与野生型大鼠进行交配，获得F1代大鼠。

3. 对交配获得的F1代大鼠进行基因型鉴定，理论上，F1代大鼠中有50%为转基因杂合子大鼠，50%为野生型大鼠。

赛业生物可提供的大鼠品系

基因编辑大鼠服务流程