基因敲除小鼠
如何选择基因敲除与条件性敲除小鼠？
| 敲除方式 | 完全性基因敲除 | 条件性基因敲除 |
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完全性基因敲除小鼠
完全性基因敲除（Knockout，KO）小鼠，也叫全身性基因敲除小鼠，是通过基因敲除技术，把需要敲除目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或者功能区域敲除掉，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。主要用于研究某个基因（要求该基因非胚胎致死性基因）对全身生理病理的功能。
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠
TurboKnockout完全性基因敲除小鼠是通过TurboKnockout技术把需要敲除目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或功能区域敲除掉，使得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因。建立在传统基因打靶技术之上的TurboKnockout基因编辑技术，不仅具有传统ES打靶技术成熟、修饰准确、效果稳定等优点，更是使得传统ES打靶技术减少两代繁育时间，周期快至4个月，是大片段基因修饰等复杂模型的首选构建方式。
TurboKnockout完全性基因敲除小鼠建系原则与流程
1. 去除抗性基因Neo：选择阳性TurboKnockout®小鼠与野⽣型小鼠杂交，自删除Neo，获得去除打靶载体中的Neo基因的F1代杂合子KO（+/-）小鼠。
2. 自交筛选：再挑选一对F1代杂合子KO小鼠（+/-）进行自交，通过PCR鉴定筛选得到基因敲除的F2纯合子KO小鼠（-/-）。
条件性基因敲除小鼠
条件性基因敲除（Conditional Knockout，CKO）小鼠，又叫组织特异性敲除小鼠，是通过染色体位点特异性重组酶系统Cre-LoxP和基因编辑技术，实现在特定的组织或细胞中基因敲除，而在其它组织或细胞中该基因表达正常的小鼠模型。与完全性敲除小鼠相比，条件敲除小鼠可以避免基因胚胎致死的问题，还可以实现基因在特异组织或者特定时间的表达，是精准研究靶基因功能的重要工具。
TurboKnockout条件性基因敲除小鼠
TurboKnockout条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出有两个loxP位点的TurboKnockout-flox小鼠，TurboKnockout-flox小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，目的基因表达完全正常；而当TurboKnockout-flox小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可以在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其它组织或细胞表达正常。TurboKnockout条件性基因敲除小鼠制作周期快至4个月。
TurboKnockout条件性基因敲除小鼠建系原则与流程
与Cre小鼠杂交：TurboKnockout-floxed小鼠与组织特异性的Cre小鼠杂交，获得去除Neo抗性且单条染色体有缺失的阳性F1组织特异性cKO杂合子小鼠（flox/-）。
自交筛选：挑选一对F1代小鼠（flox/-）进行自交，通过PCR鉴定筛选得到组织特异性敲除基因的F2代cKO纯合子小鼠（-/-）。
备注：
- 诱导型的Cre工具鼠，需要加药后才能实现特异组织删除。
- 有生殖细胞泄露风险的Cre工具鼠，繁殖时按照建议性别选择不同基因型小鼠。
- F1代若有剩余的flox杂合小鼠（flox/+），或想要加快获得目标小鼠，第2步可以用flox/+直接配Cre工具鼠，可缩短一代周期。
基因敲除小鼠定制服务流程
专业技术顾问团队与您详细沟通定制需求，包括定制类型、具体基因以及交付情况等内容，确保精准理解您的研究目标。
专业技术团队针对您的定制需求进行个性化项目分析，制定专属实施方案，并与您沟通确认，敲定最终执行细节。
方案确认后，双方签订定制服务合同，明确权责、周期与交付标准，正式启动项目。
团队严格按照确定的分析方案及合同内容，推进基因敲除小鼠模型的构建工作。
技术顾问会根据您的需求，定期向您同步项目进展，确保您随时掌握项目动态。
项目达到预定要求后，我们将提前通知您，完成模型交付的准备工作。
模型交付完成后，我们会出具项目结题报告，并提供小鼠后续饲养、繁育及鉴定建议。
TurboKnockout®基因敲除：跨越"嵌合体"阶段且自删除Neo，减少两代繁育时间
基于ES打靶技术的TurboKnockout技术采用了独特的建系和基因改造技术，建立了具有高效遗传优势的TurboKnockout ES细胞系，通过特定胚胎发育阶段的显微注射，使TurboKnockout ES细胞100%代替内源ES细胞，从而实现跨越"嵌合体"阶段，把ES打靶构建周期缩短至快至4个月。且TurboKnockout采用独特的Self-deleting Neo Cassette，所获得的TurboKnockout小鼠与任何品系小鼠交配，都可以100%自删除Neo。即TurboKnockout不仅实现跨越"嵌合体"阶段，还能真正自删除Neo，从而快速获得去除Neo的杂合子小鼠。
TurboKnockout基因编辑技术优势
- 独立自主知识产权：TurboKnockout技术无专利纠纷困扰，是涉及新药研发项目的常用技术。
- 可进行大片段基因编辑：可胜任复杂的基因修饰，实现Mb级敲入及敲除，单次最大可敲入350kb的序列，ES细胞可耐受至多7轮打靶仍具有生殖能力，如构建全基因组人源化小鼠和人源化抗体小鼠。
- 无脱靶效应：TurboKnockout技术建立在传统ES打靶技术之上，没有脱靶效应，可通过PCR、染色体核型、Southern blot检测，流式细胞术、RT-qPCR、WB等方式在细胞阶段进行项目表达检测，基因修饰准确、效果稳定。
- 周期更短：实现跨越"嵌合体"阶段且自删除Neo，减少两代繁育时间，构建周期快至4个月，同时，TurboKnockout可在ES水平做多步BAC重组，进一步缩短服务周期。
- 批量获得纯合子模型：优化的纯合ES克隆筛选系统结合囊胚前注射或四倍体补偿技术，可5个月批量获得纯合基因编辑小鼠。
- 品系选择灵活：赛业生物可提供C57BL/6NCya，C57BL/6JCya，BALB/cAnCya，129S2/SvPasCya等多品系选择。
