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过表达与干扰细胞系

过表达与干扰细胞系

稳转细胞株被广泛应用于基因功能研究、小鼠疾病模型建立、小分子药物和抗体药开发等场景。赛业生物建立了一套成熟稳定的基因干扰和过表达的实验体系,针对多种不同细胞(包括难转染细胞),均可提供稳转细胞株的构建服务。

过表达与干扰细胞系服务内容

类型规格交付标准项目周期订购
过表达细胞系
  • 组成型(慢病毒法)
  • 诱导型(慢病毒法)
  • 组成型(PB法)
  • 诱导型(PB法)
  • 稳转cell pool,2管(10^6细胞/管)
  • 单克隆细胞系,2管(10^6细胞/管)
  • 对照cell pool,2管(10^6细胞/管)
  • 实验报告:含实验基本流程、载体报告、引物序列、稳转株鉴定结果等信息
  • Cell pool:8周起
  • 单克隆:12周起
干扰细胞系
  • 组成型干扰
  • 诱导型干扰
  • 稳转cell pool,2管(10^6细胞/管)
  • 单克隆细胞系,2管(10^6细胞/管)
  • 对照cell pool,2管(10^6细胞/管)
  • 实验报告:含实验基本流程、载体报告、引物序列、稳转株鉴定结果等信息
  • Cell pool:8周起
  • 单克隆:12周起

体外细胞检测服务内容

项目交付标准项目周期订购
DNA检测:PCR和测序
mRNA检测:qPCR
蛋白检测:Western blot、流式(三激光十三色流式细胞仪)、IF、ELISA
功能检测:Luciferase assay、cAMP、钙流、细胞增殖、凋亡、周期、迁移/侵袭等
IPSC服务相关检测:STR鉴定、免疫荧光、流式、核型分析、体外三胚层分化、畸胎瘤等
细胞治疗服务相关检测:免疫细胞表型检测、CAR-T/NK细胞增殖服务、CAR-T/NK细胞杀伤服务、CAR-巨噬细胞吞噬实验服务、细胞因子检测服务、抗体药ADCC和ADPC服务
实验报告:含实验基本流程、检测结果和结论等信息
1周起

实验流程与周期示意图

基因分析
基因分析
基因致死性/同源性分析
人工智能系统设计方案(Smart-CRISPR™ 专家系统)
载体构建
载体构建
RNP合成
优化的α-Donor
质粒构建
病毒包装
细胞转染
细胞转染
高效的电转系统
病毒转导系统
PB转座子系统
多克隆分析技术
单克隆制备
单克隆制备
优化的单克隆制备工艺
单克隆分析技术
QC检测
QC检测
Sanger测序
qPCR/WB/FC/IF等
功能检测:生长曲线、细胞周期、增殖和凋亡等

过表达与干扰细胞系服务优势

丰富的成功经验:超千例项目成功案例,超250种靶细胞经验,客户多篇文献引用发表。
多种转染或感染方式:慢病毒、PB转座子等多种策略。
高调控效率和性状稳定:可实现几十、百倍的过表达水平,经过十几代甚至更高的细胞传代后,仍然维持稳定的过表达性状。
丰富多样的体外检测:提供从基因、mRNA、蛋白到功能等全套体外检测服务。
严格的质控体系:双重检测细菌、支原体等微生物,100%确保无污染;进行细胞活率检测,保证交付质量。
细胞到动物的整体服务方案:提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型建立到表型分析的全套服务。

过表达与干扰细胞系服务案例

肿瘤模型MCF-7/luciferase细胞株构建和鉴定结果

稳转株
图1. Luciferase assay结果luciferase高表达1000倍以上,显示成功构建MCF-7/luciferase细胞系
稳转株
图2. MCF-7/luc细胞系接种小鼠体内成像,显示MCF-7/luciferase细胞系可以在体内成瘤
稳转株
图3. 取骨后荧光成像,显示成功构建乳腺癌骨转移模型

抗原表达稳转细胞株构建

稳转株
K562稳转细胞株构建流式结果。K562过表达细胞株相比于对照细胞有一个log shift的位移,且阳性率为99.86%,表明成功构建K562过表达稳转株

诱导型过表达细胞株构建

稳转株
基因A诱导型过表达细胞构建和鉴定结果。基因 A过表达细胞株在DOX诱导下,相比于对照细胞有10倍以上表达,表明成功构建基因 A诱导型过表达株

体外药效评价服务

稳转株
A. CD19 CAR分子结构图示;
B. CD19 CAR-T细胞阳性率检测结果;
C. Nalm6细胞CD19抗原阳性率检测结果;
D. CD19 CAR -T杀伤Nalm6细胞实验统计结果,显示CD19 CAR-T细胞对Nalm6细胞具有显著增强的杀伤作用;
E. 杀伤实验上清中IFN-γ含量检测结果, 显示同Nalm6细胞共孵育后CD19 CAR-T细胞的IFN-γ分泌能力均显著增强。