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基因敲入细胞系

基因敲入细胞系

赛业生物提供基因敲入细胞株的构建服务,将人源化的Cas蛋白、双靶点gRNA和Oligo DNA(donor DNA)三组分同时转染至目的细胞,产生高效同源重组,实现基因的敲入。

基因敲入细胞系定制服务

相比于基因敲除(KO),在设计基因敲入(KI)的实验方案时需考虑的影响因素更多,如敲入基因片段的长短、同源重组效率等,且不同细胞系之间的基因敲入效率差异很大,这也使得KI的技术难度更高。赛业生物提供基因敲入细胞株的构建服务,将人源化的Cas蛋白、双靶点gRNA和Oligo DNA(donor DNA)三组分同时转染至目的细胞,产生高效同源重组,实现基因的敲入。基于Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统,定制KI细胞服务,快至12周交付。

实验流程

基因/细胞<br>分析
基因/细胞
分析
sgRNA、donor<br>设计与合成
sgRNA、donor
设计与合成
细胞转染及<br>KI效果鉴定
细胞转染及
KI效果鉴定
单克隆化
单克隆化
测序分析
测序分析
复检及扩增
复检及扩增

交付内容

细胞鉴定报告;实验报告(含载体报告、实验流程、测序原始数据等);基因敲入细胞系

规模庞大、品种齐全的科研细胞库

神经系统
BV-2
SH-SY5Y
SK-N-SH
LN229
U251
U-87 MG
ARPE-19
BeWo
……
呼吸系统
BEAS-2B
Calu-1
NCI-H1975
SK-MES-1
NCI-H460
A549
NCI-H1299
NCI-H358
……
循环(心血管)系统
NK-92
U266B1
HL-60
K-562
RPMI 8226
CCRF-CEM
Reh
HuT78
……
消化系统
FaDu
Caco-2
T84
HCT 116
NCI-H716
RKO
HT-29
SW480
……
生殖系统
CHO-K1
C-33 A
Hela
LNCaP Clone FGC
PC-3
22RV1
SK-OV-3
NIH:OVCAR-3
……
泌尿系统
ACHN
HEK 293
293-L.P
786-0
HK-2
Caki-1
SW-13
5637
……
运动(肌肉)系统
HT-1080
MG-63
U-2 OS
RD
Saos-2
SW1353
A-673
C2C12
……
内分泌系统
SHZ-88
BHK-21
HPDE6-C7
ZR-75-1
MCF-7
MDA-MB-231
T-47D
SK-BR-3
……
免疫系统
U-937
RAJI
HMy2.CIR
A375
A-431
SK-MEL-28
SU-DHL-2
A875
……

基因敲入细胞系服务优势

成熟的技术平台

从体内动物实验到体外细胞实验,拥有18年基因编辑经验,每年构建体内体外模型超万例,已有多篇文献引用发表,可提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型构建及表型分析的全流程服务。

独创Smart-CRISPR™技术

拥有全新升级的Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统,轻松实现基因敲除、基因敲入等多种策略,编辑效率高达90%。

规模庞大、品种齐全的科研细胞库

我们建设了有各项参数明确、性能稳定的科研细胞库,极大程度规避了基因编辑对细胞的负面影响。

严格的质量控制体系

进行细菌、支原体等微生物的双重检测,确保100%无污染,并充分鉴定基因编辑效果;进行细胞活率检测,保证交付质量。

基因敲入细胞系服务案例

AAVS1位点是一个开放的染色体结构,能保证转入基因能被正常转录。另外很重要的一点是在该位点插入外源目的片段对细胞无已知的副作用。通过CRISPR/Cas基因编辑技术,将8.6kb的片段敲入该位点。如图所示,在该位点上设计sgRNA,利用α-donor体系将gRNA和Donor递送到iPS细胞中,Cell Pool检测到5arm-KI、KI-3arm及KI短片段扩增均有目的条带,且条带明亮,通过制备单克隆获得KI纯合子和杂合子。