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iPS细胞技术服务
赛业生物iPS细胞一站式体外技术服务平台,拥有成熟的重编程、基因编辑和体外分化技术,同时结合一站式表型分析服务,可为客户打造多种疾病应用场景的体外模型构建和检测服务。
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iPS细胞技术服务研究思路
iPS细胞技术服务内容
类型
项目
交付标准
质量控制QC
项目周期
订购
重编程
iPSC 重编程技术服务
1个iPSC克隆,每个克隆提供冻存细胞2管(10⁶细胞/管)
实验报告
流式检测SSEA4/TRA-1-81
免疫荧光检测OCT4/NANOG
核型分析
微生物检测
STR
体外三胚层(可选)
畸胎瘤(可选)
外源残留检测
12周起
订购
基因编辑细胞系(iPSC)
基因敲除
单克隆细胞株,2管(10⁶细胞/管)
实验报告
PCR和测序
免疫荧光
8周起
订购
定点突变
12周起
订购
基因敲入
12周起
订购
稳转细胞系(iPSC)
干扰稳转株
稳转细胞株,2管/株(10⁶细胞/管)
对照细胞株
实验报告
qPCR
免疫荧光
9周起
订购
过表达稳转株
8周起
订购
定向分化
运动神经元分化
107运动神经元前体细胞和成熟运动神经元分化试剂盒
免疫荧光(MNP Oligo2/MNs CHAT)
6周起
订购
CD34+分化
冻存细胞2管(10⁶细胞/管)
qPCR
流式
免疫荧光
3周起
订购
NPC神经祖细胞分化
冻存细胞2管(10⁶细胞/管)
免疫荧光(SOX2/PAX6/Nestin)
2周起
订购
RPE分化
10^7 RPE前体细胞和RPE成熟分化试剂盒
免疫荧光(转录因子MiTF/成熟RPEZO-1)
5周起
订购
肝类器官分化
1管冻存肝类器官(1组-10个)
qPCR
流式
免疫荧光
8周起
订购
* 额外检测服务根据客户需求:可提供核型、脱靶、流式、WB、luciferase、增殖、凋亡、周期、迁移/侵袭等。
iPS细胞技术服务优势
重编程
难点:
早期的方法依赖逆转录病毒和慢病毒载体等,但可能存在病毒基因组整合导致转基因被重新激活的风险。
解决方案:
采用非整合方式进行重编程,以此转录和表达多能干细胞基因,产生非整合的人iPS细胞,该方法的安全系数高于使用病毒载体。
细胞培养
难点:
培养条件苛刻,编辑过程容易分化,失去干性。
解决方案:
18年干细胞培养经验,拥有成熟的iPSC编辑和培养体系。通过赛业生物的培养体系,我们可培养出理想的iPSC集落:内部紧实、大小均匀且边缘清晰。
iPSC基因编辑
难点:
不同个体和组织来源的iPSC差异较大,基因操作难度高。
解决方案:
成熟稳定的基因编辑平台,拥有上万例基因编辑项目经验,iPSC项目成功经验丰富。
智能的Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统:可科学设计高效率、低脱靶的gRNA。
自研的α-donor载体HDR系统:HDR效率高达50%,远高于市面上的编辑效率,可实现无痕修复(footprint-free)。
合适的转染条件:通过优化转染条件,转染效率>50%,活率高达80%。
RNP递送体系:选择RNP递送提升gRNA切割效率和转染细胞活率,降低脱靶效率,KO效率高达90%。
单克隆形成
难点:
单克隆化制备复杂,克隆形成率较低。
解决方案:
具备独特的单细胞筛选技术,单克隆形成率可达30%以上,通过筛选一轮即可获得足够的阳性克隆。
定向分化
难点:
不同来源iPSC细胞系之间存在分化能力和增殖速率的差异性。
解决方案:
通过优先选择与分化细胞类型更适配的iPSC,且在培养基和添加剂层面进行优化,大大提升其特异性和分化效率,有效降低未成熟或未分化的细胞比率。
iPS细胞技术服务案例
1. iPSC重编程
细胞形态
核型检测
STR分型检测
细胞特异性标志物
流式检测
体外三胚层分化
畸胎瘤验证
2. iPSC基因编辑
通过基因编辑技术,在诱导性多能干细胞iPSC中的AAVS1位点敲入EGFP 基因。如下图所示,通过RNP法将sgRNA和Donor转染到iPSC中,经过HDR途径将EGFP序列插入AAVS1位点。
图1. 敲入方案设计
注:引物设计策略为扩增整个EGFP及其所在基因组上下游的部分序列。无插入EGFP的带型为762bp,成功插入EGFP的带型为3194bp处。结果显示,4个单克隆在3194bp处出现条带,说明克隆成功插入EGFP,且为纯合克隆。
PCR凝胶电泳验证数据
图2. iPS-EGFP KI琼脂糖凝胶电泳鉴定结果
注:引物设计策略为扩增整个EGFP及其所在基因组上下游的部分序列。无插入EGFP的带型为762bp,成功插入EGFP的带型为3194bp处。结果显示,4个单克隆在3194bp处出现条带,说明克隆成功插入EGFP,且为纯合克隆。
测序验证数据
图3. iPSC-EGFP KI测序结果
纯合单克隆荧光验证
EGFP在IPSC纯合克隆中100%表达
图4. iPSC-EGFP KI纯合克隆荧光图片
核型分析数据验证
细胞培养后经G显带进行染色体核型分析,显示染色体数为46数目正常,染色体结构无明显异常。
图5. iPSC-EGFP KI核型分析
免疫荧光-干性检测
通过免疫荧光染色,检测NANOG、OCT4和SOX2三个干性标记基因,均能检测出阳性信号,表明该敲入细胞具有干性
图6. iPSC-EGFP免疫荧光-干性检测
3. iPSC定向分化
神经干细胞(NPC)分化——神经疾病及药物模型
运动神经元(MN)分化——ALS等神经疾病及药物模型
造血干细胞(CD34+)分化——可用于血液谱系细胞分化如NK、T细胞等
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