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核心要点：in vivo CAR-T临床前评价需要哪些证据？
模型选型需结合递送路线、靶点和研究终点。原稿介绍PBMC、HSC及ProF等人源化体系，并提供相应模型资源。
案例以外周血、脾脏和骨髓为观察对象，分别检测B细胞清除、CAR-T产生与动态扩增，以及效应/记忆表型、PD-1和CD4/CD8构成。
药效证据还需衔接非目标细胞CAR信号和细胞因子水平。原稿同时报告骨髓残留及部分非目标细胞阳性，评价不应只看单一阳性结果。
国产in vivo CAR-T研发呈现哪些进展？
近期in vivo CAR-T赛道热度集中爆发，国产力量崛起：
Nature Medicine重磅随访出炉：ESO-T01 BCMA in vivo CAR-T最长15个月长期数据公布，给行业补上了大家最关心的长期存续、安全性证据，打破in vivo CAR-T只有短期数据的局面。
IMS国际骨髓瘤年会密集披露国内First-in-human数据，驯鹿、启函等多款BCMA管线亮相。驯鹿IASO208成为国内首个慢病毒in vivo CAR-T拿到FDA IND，出海提速。
从血液瘤向自身免疫病拓展：神经免疫疾病的in vivo CD19 CAR-T登上顶刊，无需清淋，单次给药即可在体内稳定生成CAR-T，为多发性硬化、重症肌无力等难治免疫病开辟全新路径。
技术路线百花齐放：慢病毒、靶向 AAV、LNP-mRNA多条递送路线并行，不再只有单一方案。全球在研项目中，中国团队主导占比极高，成为in vivo CAR-T转化的核心阵地。
in vivo CAR-T希望解决哪些研发与制备痛点？
它到底解决了什么痛点？
1. 告别一人一药定制生产，向标准化、现货型产品靠拢，大幅压缩供应链压力。
2. 省去白细胞分离、体外培养，适配快速进展、来不及等待体外制备的危重患者。
3. 部分候选产品支持免清淋方案，降低化疗预处理带来的感染、骨髓抑制风险。
4. 体内原生T细胞改造，避开体外扩增带来的T细胞耗竭问题，有望获得更长存续的记忆型CAR-T。
当然，赛道仍有硬核关卡待攻克：载体靶向精准度、体内转染效率、脱靶修饰风险、长期插入突变风险、体内CAR-T扩增峰值可控性，都是转化路上必须回答的问题。赛业生物in vivo CAR-T全流程解决方案，依托自研人源化小鼠矩阵+标准化药效评价体系，覆盖靶点验证、药效评估、安全性、脱靶检测全环节，为药企打通从分子机制到临床申报的转化通道！
希望讨论in vivo CAR-T模型、药效与安全性评价方案？可提交研究需求，进一步沟通项目适配。
in vivo CAR-T药效评价如何选择人源化模型？
三大免疫系统人源化重建模型，适配in vivo CAR-T药效评价需求
赛业生物基于自研的重度免疫缺陷小鼠C-NKG（C001316），通过移植人外周血单个核细胞和造血干细胞，成功搭建huPBMC-C-NKG（C001329）、huHSC-C-NKG（C001328）、升级版全免疫重建小鼠huHSC-C-NKG-ProF（C001543）三大模型体系，ProF全免疫重建小鼠可完整复刻T/B/NK、树突状细胞、巨噬细胞等全套人源免疫谱系，产出功能性抗原特异性T细胞，全方位支撑细胞治疗、肿瘤疫苗、双抗、髓系靶点新药的临床前体内研究。
案例：如何评价B细胞清除与CAR-T体内扩增？
案例精选：用于B细胞清除的in vivo CAR-T药效评价
in vivo CAR-T药物清除B细胞的药效和CAR-T扩增的检测
in vivo CAR-T药物实验组产生B细胞清除的效果，对照组保持较高的hCD19+比例
我们通过huHSC-C-NKG-ProF小鼠*的每周外周血的流式检测（图1A），发现对照组在in vivo CAR-T实验中维持较高的人源化比例（图1B和C）。注射in vivo CAR-T药物的小鼠在D7-D42有较高的hCD3+占hCD45+的比例和较低的hCD19+占hCD45+的比例（图1B、D和E），同时对照组维持较高的B细胞的数量（图1F）。
*全免疫系统重建小鼠huHSC-C-NKG-ProF（产品编号：C001543）
图1. 小鼠外周血in vivo CAR-T的B细胞清除的药效的检测。
(A) 实验设计图：小鼠在in vivo CAR-T药物注射前2天检测人源化比例并分组，药物注射后每周检测外周血，实验终点为第42天，安乐小鼠获得外周血、脾脏和骨髓做流式细胞术检测。
(B) 各组小鼠药物注射后第7天-第42天外周血中hCD45+细胞亚群的hCD3、hCD19比例的代表性流式图。
(C) 各组小鼠第7天-第42天外周血中人源化比例的统计图。
(D) 各组小鼠第7天-第42天外周血中hCD3+占hCD45+的比例的统计图。
(E) 各组小鼠第-2天-第42天外周血中hCD19+占hCD45+的比例的统计图。
(F) 各组小鼠第7天-第42天100 μL外周血中hCD19+的绝对细胞计数的统计图（n=4, mean±SEM）。
in vivo CAR-T药物在小鼠外周血中可检测到CAR-T细胞的产生，其扩增峰值在第14天左右
我们分析了小鼠外周血CAR+细胞的比例和数量，结果显示，注射in vivo CAR-T药物的小鼠的CAR-T的扩增峰值在第14天左右且有明显的CAR+细胞的分群（图2A、B和C）。
图2. 小鼠外周血in vivo CAR-T的动态扩增的检测。
(A) 展示in vivo CAR-T扩增峰值第14天，各组小鼠外周血hCD3+细胞群中CAR+比例的代表性流式图。
(B) 各组小鼠第7天-第42天外周血中CAR+占hCD3+的比例的统计图。
(C) 各组小鼠第7天-第42天100 μL外周血中hCD3+CAR+的绝对细胞计数的统计图（n=4, mean±SEM）。
in vivo CAR-T药物在小鼠脾脏和骨髓中具有B细胞的清除作用，小鼠脾脏和骨髓中可检测到CAR-T细胞
在实验终点时，我们取材小鼠脾脏和骨髓做流式染色分析，结果显示，in vivo CAR-T-2和in vivo CAR-T-3在小鼠脾脏有较好的清除效果，而在大部分小鼠的骨髓中仍有CD19荧光密度低的B细胞残留（图3A、B和C）。in vivo CAR-T-2和in vivo CAR-T-3在小鼠脾脏和骨髓中均有可检测到的CAR-T细胞，骨髓中的CAR-T细胞的数量和比例较脾脏更高（图3D、E和F）。
图3. 小鼠脾脏和骨髓中in vivo CAR-T的B细胞清除药效和CAR-T扩增的检测。
(A) 展示in vivo CAR-T在各组小鼠在实验终点时脾脏和骨髓中hCD45+细胞亚群的hCD3、hCD19比例的代表性流式图。
(B) 各组小鼠在脾脏中hCD19+占hCD45+的比例的统计图。
(C) 各组小鼠在骨髓中CAR+占hCD3+的比例的统计图。
(D) 展示in vivo CAR-T在各组小鼠脾脏和骨髓中hCD3+细胞群中CAR+比例的代表性流式图。
(E) 各组小鼠在脾脏中CAR+占hCD3+的比例的统计图。
(F) 各组小鼠在骨髓中CAR+占hCD3+的比例的统计图（n=4, mean±SEM）。
CAR-T免疫表型需要观察哪些指标？
in vivo CAR-T药物CAR-T细胞的免疫表型
in vivo CAR-T药物转导的CAR-T细胞与对照T细胞相比，其表型更趋向于TEM和Teff
我们分析对照组T细胞和实验组CAR-T细胞的效应或记忆型。结果显示，无论是在外周血、脾脏还是骨髓中，CAR-T细胞均有较少的TN/TSCM，其表型更倾向于TEM和Teff（图4）。
图4. 小鼠外周血、脾脏和骨髓中in vivo CAR-T的效应记忆性表征。
展示对照组T细胞和实验组in vivo CAR-T细胞在各组小鼠外周血（扩增峰值第14天，左图）、实验终点时脾脏（中间图）和骨髓（右图）中T细胞或CAR-T细胞的CCR7和CD45RA的代表性流式图和TN/TSCM、TCM、TEM和Teff的占比统计图（n=4, mean±SEM）。
in vivo CAR药物转导的CAR-T细胞与对照T细胞相比，具有较高的PD-1+细胞的比例
我们分析对照组T细胞和实验组CAR-T细胞的PD-1分子的表达。结果显示，无论是在外周血、脾脏还是骨髓中，CAR-T细胞均有较对照T细胞高的PD-1阳性的比例（图5A、B和C），这可能说明CAR-T细胞更耗竭。
图5. 小鼠外周血、脾脏和骨髓中in vivo CAR-T的PD-1的表达。
(A) 展示对照组T细胞和实验组in vivo CAR-T细胞在各组小鼠外周血（扩增峰值第14天）、脾脏和骨髓（实验终点）中T细胞或CAR-T细胞的PD-1表达的代表性流式图。
(B) 各组小鼠在药物注射后第14天时外周血中hPD-1+占T细胞或CAR-T细胞的比例的统计图。
(C) 各组小鼠在实验终点时脾脏（左图）和骨髓（右图）中hPD-1+占T细胞或CAR-T细胞的比例的统计图（n=4, mean±SEM）。
in vivo CAR-T-2和in vivo CAR-T-3药物转导的CAR-T细胞与对照T细胞相比具有较高的CD8+细胞的比例
我们分析对照组T细胞和实验组CAR-T细胞的CD4和CD8的比例。结果显示，无论是在外周血、脾脏还是骨髓中，in vivo CAR-T-2和in vivo CAR-T-3组有更多的CAR-T细胞为CD8阳性（图6A和B）。
图6. 小鼠外周血、脾脏和骨髓中in vivo CAR-T的CD4/CD8的比例。
(A) 展示对照组T细胞和实验组in vivo CAR-T细胞在各组小鼠外周血（扩增峰值第14天）、脾脏和骨髓（实验终点）中T细胞或CAR-T细胞的CD4/CD8的代表性流式图。
(B) 各组小鼠在药物注射后第14天时外周血中CD4/CD8占T细胞或CAR-T细胞的比例的统计图（n=4, mean±SEM）。
如何检测非目标细胞中的CAR信号？
in vivo CAR-T药物的脱靶效应的流式检测
in vivo CAR-T药物转导的CAR+细胞在B细胞、NK细胞、单核细胞和其它hCD45+CD3-的细胞中的流式分析
in vivo CAR-T药物的脱靶效应分析结果显示，在脾脏和骨髓中，in vivo CAR-T-2和in vivo CAR-T-3组出现了部分单核细胞阳性，同时在人的非T、B、NK、单核细胞中出现的一定的CAR+细胞（图7A、B、C和D）。
图7. 小鼠脾脏和骨髓中in vivo CAR-T药物的脱靶效应的流式检测。
(A) 展示对照组T细胞和实验组in vivo CAR-T细胞在实验终点时的脾脏中B细胞、NK细胞、单核细胞和其它hCD45+CD3-的细胞中CAR+细胞的代表性流式图。
(B) 展示对照组T细胞和实验组in vivo CAR-T细胞在实验终点时的骨髓中B细胞、NK细胞、单核细胞和其它hCD45+CD3-的细胞中CAR+细胞的代表性流式图。
(C) 实验组脾脏中B细胞、NK细胞、单核细胞和其它hCD45+CD3-的细胞的CAR+细胞数量的统计图。
(D) 实验组骨髓中B细胞、NK细胞、单核细胞和其它hCD45+CD3-的细胞的CAR+细胞数量的统计图（n=4, mean±SEM）。
如何评价体内细胞因子释放与CRS相关风险？
in vivo CAR-T药物体内CRS评价
分析in vivo CAR-T药物体内细胞因子释放水平，评价药物治疗后是否产生CRS风险。结果显示，外周血中，三种药物治疗后细胞因子释放水平较低，暂无展示出明显的CRS风险（图8A-E）。
图8. in vivo CAR-T药物体内细胞因子释放水平
展示对照组T细胞和实验组in vivo CAR-T细胞在各时间点外周血中细胞因子释放水平，(A) IFN-γ, (B) TNF, (C) hIL-10, (D) hIL-6, (E) hIL-2（n=4, mean±SEM）。
in vivo CAR-T人源化动物模型推荐
in vivo CAR-T人源化动物模型推荐
免疫系统人源化重建模型
| 产品编号 | 产品名称 | 模型特性 |
|---|---|---|
| C001543 | huHSC-C-NKG-ProF 小鼠 | 全免疫系统重建，重建淋巴系的T、B、NK细胞以及髓系的树突细胞（DC）、单核细胞、巨噬细胞和粒细胞等，8周人源化比例达40-60% |
| C001544 | huHSC-C-NKG-ProM 小鼠 | 重建淋巴系的T、B细胞以及髓系的单核细胞等，8周人源化比例达40-60% |
| C001545 | huHSC-C-NKG-ProN 小鼠 | 重建淋巴系的T、B、NK细胞，几乎无髓系发育，8周人源化比例达40-60% |
| C001526 | huHSC-C-NKG-hIL15 小鼠 | 重建多种免疫细胞，寿命较长，尤其是能够有效重建人源NK细胞，移植后第3周得到快速重建 |
| C001328 | huHSC-C-NKG 小鼠 | 支持人源淋系细胞和人源髓系细胞分化，人源细胞长效存在>1年，寿命长，通常不存在GvHD，实验窗口期长 |
| C001329 | huPBMC-C-NKG 小鼠 | 重建效率高、速度快，移植3周后外周血中人源CD45+的平均比例在50%左右，重建后以淋巴T细胞为主 |
靶点人源化模型精选
随着CD3、BCMA、CD20等免疫靶点在细胞治疗领域的快速发展，靶点人源化模型已成为in vivo CAR-T及其他免疫疗法临床前评价的关键工具。通过模拟人体靶点表达环境，支持CAR设计验证、靶点依赖性分析及药效评价，并进一步拓展至多靶点共人源化及复杂免疫通路研究。
标准化药效评价可覆盖哪些研究环节？
in vivo CAR-T标准化药效评价服务
可提供基于人源化模型开展标准化体内药效实验，包括载体递送效率检测、CAR-T细胞体内表达定量、靶细胞（肿瘤细胞/ B细胞）清除能力评估、肿瘤生长抑制率测算、动物安全性与生存期监测等，形成完整临床前数据报告。
in vivo CAR-T 一站式解决方案
围绕CAR-T药物从机制研究到临床前评价，衔接人源化模型、体内表达与扩增、靶细胞清除、免疫表型及安全性相关检测，帮助研发团队按项目阶段规划研究方案。
如何衔接IND申报相关研究？
IND申报定制化解决方案赋能新药研发
在全球生物医药研发竞速赛道上，赛业生物依托覆盖靶点验证→模型构建→药效评价→IND申报的完整技术链条，为全球合作伙伴提供从早期研发到临床前申报的定制化解决方案，显著缩短研发周期，降低申报风险，已成为生物医药企业IND申报进程中可信赖的技术伙伴。
| 研究领域 | 合作机构 | 合作内容 |
|---|---|---|
| 肿瘤免疫治疗 | 凯米生物医药（成都）有限公司 | 赛业生物助力凯米生物KMV002通用免疫疗法获FDA临床试验批准 |
| 眼科基因治疗 | 北京因诺惟康医药科技有限公司 | 赛业生物助力因诺惟康在X连锁视网膜劈（XLRS）基因治疗项目上的临床转化 |
| 眼科基因治疗 | 北京因诺惟康医药科技有限公司 | 赛业生物助力因诺惟康在新生血管性年龄相关性黄斑变性（nAMD）基因治疗项目上的临床转化 |
| 代谢和心血管疾病 | 恒瑞医药及上海拓界生物医药科技有限公司 | 赛业生物助力恒瑞医药创新药HRS -5346与默沙东达成全球合作 |
| 血液系统疾病 | 赛诺哈勃药业（成都）有限公司 | 赛业生物助力合作伙伴赛诺哈勃药业SNH-119014项目获批临床试验 |
| 细胞治疗 | 广州智瓴生物医药有限公司 | 赛业生物助力智瓴生物ZLT-001注射液获批临床试验默示许可 |
| 神经领域 | 患者家庭PIT研究联盟（医院-科研联合体） | 赛业生物助力全球首例GM2基因疗法进行临床试验 |
如何综合理解B细胞清除、扩增与安全性读数？
按原文案例，外周血、脾脏与骨髓中的结果并不完全相同：部分骨髓中仍有CD19荧光密度低的B细胞残留，部分单核细胞和其他人源细胞也出现CAR阳性信号。因此，应将靶细胞清除、CAR-T数量、组织分布与非目标细胞检测分开记录，再综合判断。
案例中的PD-1比例和细胞因子水平属于相应实验条件下的观察。原文对PD-1的解释使用“可能”，对CRS相关读数也限定于本次实验；不宜将其改写为所有候选产品的统一结论。
相关模型、研究平台与资料
iCyagen：辅助前期资料检索与方案梳理
开展in vivo CAR-T靶点和模型调研时，可通过iCyagen辅助整理基因、疾病和模型相关信息，再结合实验数据与项目目标确认具体研究方案。
准备开展in vivo CAR-T临床前研究？可提供递送路线、靶点、已有数据与研究终点，讨论人源化模型及评价方案。
页面标签
FAQ：in vivo CAR-T临床前评价常见问题
in vivo CAR-T临床前评价一般需要观察什么？
原文覆盖载体递送效率、CAR-T体内表达与扩增、靶细胞清除、免疫表型、非目标细胞CAR信号、细胞因子及动物安全性等环节。
如何选择in vivo CAR-T人源化小鼠？
可结合研究需要的免疫细胞组成、重建特征与研究窗口，核对PBMC、HSC及升级模型资料，再按候选分子机制和检测终点评估适配。
B细胞清除和CAR-T扩增如何检测？
案例通过连续外周血流式检测及实验终点脾脏、骨髓检测，分别观察hCD19、CAR阳性比例与绝对计数。
案例中的CAR-T扩增峰值出现在什么时候？
原文报告该案例外周血CAR-T扩增峰值约在第14天。该时间属于相应分子、模型和给药条件，不是所有产品的固定规律。
脱靶效应为什么要关注非T细胞？
原文对B细胞、NK细胞、单核细胞及其他hCD45+CD3-细胞进行CAR信号检测，并报告部分非目标细胞阳性，提示需将其作为独立评价内容。
如何理解体内细胞因子释放与CRS相关结果？
原文检测IFN-γ、TNF、hIL-10、hIL-6及hIL-2，案例中释放水平较低。该结果仅支持相应试验条件下的观察，不替代每个新候选产品的安全性评价。
