HUGO-LightTM双/多特异性抗体平台如何突破轻重链错配瓶颈？
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双/多特异性抗体药物持续升温，但轻重链随机错配、组装效率低、研发周期漫长，依然是创新抗体项目推进中的核心瓶颈。传统双抗开发中，目标产物组装率往往只有约 25%，研发周期常被拉长至 12 至 18 个月，下游纯化难度也随之显著提升。
HUGO-LightTM双/多特异性抗体平台 以 HUGO-Light 全人共轻链抗体小鼠为核心载体，通过固定轻链、同时保留高度多样化的重链可变区，简化双/多抗筛选开发流程，从源头解决错配、低效与周期长等问题，并与 HUGO-Ab®抗体发现引擎、HUGO-Mab®单克隆抗体平台 共同构成更完整的创新抗体研发体系。
一、固定轻链策略如何重构双/多抗开发流程
HUGO-Light 小鼠依托 TurboKnockout 技术实现精准基因改造：重链部分沿用 HUGO-Mab®全人源重链平台，将可变区完整替换为人源 VDJ 全长序列；Kappa 轻链部分原位插入 1 组固定人源 VJ 轻链，并删除其余轻链可变区基因；λ 轻链则完全敲除，确保所有抗体仅使用唯一指定轻链。
这种设计让平台产出的全人源抗体候选分子共用一条固定人源 κ 通用轻链。经平台筛选获得的靶标特异性重链，可以先完成重组表达与功能筛选，再依托 KiH 杵臼或其他重链异二聚化技术改构为 IgG 样双特异性抗体。整套工艺既能解决轻链错配难题，也能保留充足抗体多样性，支撑后续先导分子筛选与抗体工程改造。
图1 HUGO-Light小鼠抗体基因结构示意图
围绕这一逻辑，平台的双/多抗开发流程可以拆解为三个关键步骤：先利用 HUGO-Light 小鼠制备靶标特异性抗体，全部候选抗体共用固定人源 κ 通用轻链并搭配多样化人源重链文库；再将筛选得到的重链可变区与共用轻链配对，完成重组表达与功能筛选；最后借助重链异二聚化技术实现高纯度 IgG 样双特异性抗体组装。
图2 HUGO-Light双/多特异性抗体开发流程
二、平台核心优势：效率、授权与模块化拓展
1. 极简筛选，效率倍增
平台通过消除轻重链随机配对的不确定性，将研发重点集中到高亲和力重链的筛选上。双抗正确组装率可由传统约 25% 提升至 95% 以上，筛选效率实现量级提升，研发周期可从 12 至 18 个月缩短至 6 至 8 个月。
2. 一次购买，永久授权
小鼠与共轻链双抗结构专利可打包出售。无需里程碑付款，买断后即可获得全部权益，更适合希望尽快推进后续管线开发和资产化布局的团队。
3. 结构简化，但免疫效果不打折
虽然 HUGO-Light 小鼠将抗体结构简化为“优选单一轻链 + 多样化重链”的组合，但其免疫效能并未因此牺牲。平台已在 CD3、TCR、KLK2、STEAP1 等多个高难度靶点上成功获得功能突出的候选抗体，其中靶向 CD3 的候选分子还明确展现出人与食蟹猴交叉结合活性。
4. 积木式模块组装
优质重链 Binder 可作为标准化模块，与固定共轻链自由组合、即插即用，快速搭建双/多特异性抗体、T 细胞衔接器（TCE）及血脑屏障穿梭载体等复杂分子，也可进一步衔接 in vivo CAR-T、中枢药物递送与热门靶点组合开发。
对于既关注双/多抗组装效率，又希望保留后续工程改造自由度的项目，这类固定轻链平台更适合作为前端发现入口。
三、验证数据：从序列多样性到免疫应答
1. HUGO-Light 小鼠抗体序列多样性检测
取未免疫小鼠脾脏提取 RNA 后构建文库并测序，分析重链可变区序列多样性。结果显示，HUGO-Light 小鼠重链抗体可变区序列多样性丰富，且各家族使用频率与人体中重链抗体家族使用频率相近，说明平台能够较好复刻人源重链多样性。
图3 HUGO-Light小鼠脾脏B细胞中重链抗体序列VDJ重排表达检测
2. HUGO-Light 小鼠免疫细胞分型
对小鼠脾脏、外周血中的 T、B、NK 细胞进行流式免疫分型与统计学对比后发现，相较于野生型小鼠，HUGO-Light 小鼠脾脏 B 细胞、T 细胞、NK 细胞数量均无显著差异，说明其基础免疫细胞组成保持稳定。
图4 HUGO-Light小鼠脾脏、外周血B/T/NK细胞比例正常
3. HUGO-Light 小鼠免疫效价测试
8 种全人源共轻链抗体鼠在完成 4 次免疫后，均可检测到高效价免疫反应，虽然不同个体之间存在一定差异，但整体说明平台具备较强的免疫激活能力。
图5 HUGO-Light小鼠免疫后血清抗体滴度
4. mRNA-LNP 免疫方案适配难免疫靶点
针对多次跨膜蛋白等难免疫靶点，HUGO-Light 小鼠适配每两周一次的体内 mRNA-LNP 免疫方案。免疫后，无论针对人源蛋白抗原还是过表达靶抗原的 CHO-K1 细胞，均可检测到高滴度特异性血清抗体；四轮免疫后血清滴度可达 243,000 至 729,000，证明该方案能够有效激活免疫、获得丰富 B 细胞库，支撑后续抗体筛选。
图6 HUGO-Light小鼠mRNA-LNP免疫应答验证数据
四、靶点筛选案例：DLL3 与 CD3 如何被突破
1. 基于 HUGO-Light 小鼠开展抗 DLL3 抗体筛选
在 DLL3 筛选案例中，研究团队选取 30 个分子进行抗体表达，并用表达上清完成初筛；随后选择 OD450 大于 1 的 13 株抗体进行纯化。ELISA 结合活性检测结果显示，这 13 株抗体分子均展现出明显结合活性，其中 9 株 EC50 已达到皮摩尔水平，说明平台具备较强的候选分子输出效率。
图7 HUGO-Light小鼠抗DLL3抗体发现相关数据
2. 基于 HUGO-Light 小鼠开展抗 CD3 抗体筛选
CD3 复合物结构复杂，是双特异性 T 细胞衔接器开发中的经典难点，常规免疫方式往往难以获得具备 T 细胞激活活性的抗体。四轮 CD3 复合物 mRNA-LNP 免疫后，HUGO-Light 与 HUGO-Mab 小鼠血清均可强效结合 Jurkat 细胞，两组小鼠的细胞水平免疫滴度均高于 1:27000。
图8 Jurkat细胞CD3免疫血清结合滴度
在后续分选环节中，高通量流式单细胞分选获得超过 150 株 CD3E 阳性克隆。丰富的固定轻链候选库使研究者能够更精准地调控 CD3 结合亲和力，而这正是降低细胞因子释放综合征（CRS）风险、同时提升双抗肿瘤杀伤效果的关键。
图9 抗CD3筛选流程单细胞分选与ELISA结合检测
考虑到重组 CD3E 蛋白与细胞膜天然 CD3 复合物的构象存在差异，团队进一步使用 Jurkat 细胞检测候选抗体的细胞水平结合特异性。流式结果表明：2 株 HUGO-Mab 来源抗体与 6 株 HUGO-Light 来源抗体可强效结合高表达 CD3 的 Jurkat 细胞，而对 CD3E 敲除 Jurkat 细胞无结合。
图10 抗CD3抗体在Jurkat/CD3E敲除Jurkat细胞上的流式结合曲线
在人与食蟹猴外周血交叉结合验证中，将 2 株 HUGO-Mab 来源抗体和 6 株 HUGO-Light 来源抗体与人、食蟹猴 PBMC 共孵育后发现，其中 2 株 HUGO-Light 通用轻链抗体可同时结合人源与食蟹猴 PBMC，满足临床前动物交叉验证需求。
图11 抗CD3通用轻链抗体结合人、食蟹猴PBMC荧光强度曲线
五、CD3 共轻链分子价值与合作模式
基于 HUGO-Light 平台开发的全人源 CD3 共轻链抗体分子，可特异识别 CD3ε/δ 构象表位，兼具温和 T 细胞激活能力与 TCE 功能验证优势，是下一代安全型 T 细胞连接器开发的优质 CD3 结合模块。
CD3 抗体分子亮点
识别 CD3ε/δ 异二聚体构象表位。
全人源抗体，潜在免疫原性更低。
对 CD3 阳性细胞具备良好特异性。
兼具人源与食蟹猴 CD3 交叉结合能力。
温和 T 细胞激活，具备潜在降低 CRS 风险的开发价值。
已完成 STEAP1×CD3、CD19×CD3 TCE 功能验证，具备较高成药潜力。
适用于 TCE、双抗、多抗与 in vivo CAR-T 等多类场景。
平台合作模式
- 小鼠直供模式：交付绝育抗体小鼠，抗原免疫与抗体效价检测等实验由客户在指定设施内自主完成。
- 一站式抗体筛选服务：覆盖小鼠免疫、抗体筛选与抗体活性验证全流程。
- 联合开发模式：整合双方技术与资源优势，协同开发创新型抗体疗法。
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FAQ
更适合对轻重链错配控制、双抗组装效率、后续模块化改造自由度要求较高的双/多特异性抗体、TCE 与 in vivo CAR-T 相关项目。
因为该设计从源头减少了轻链随机配对带来的复杂性，让研发重点集中在重链筛选与后续功能验证上，从而显著提高正确组装率并缩短研发周期。
HUGO-LightTM 更聚焦共轻链双/多抗开发；HUGO-Mab® 提供全人源单抗重链基础；HUGO-Ab-eKO® 则更适合解决高同源靶点免疫激活困难的问题，三者可按项目阶段组合使用。
因为具备人与食蟹猴交叉结合能力的候选抗体，更便于后续开展灵长类动物临床前验证，有助于提升项目向下一阶段推进的可行性。
