PD-1/PD-L1仍是肿瘤免疫治疗与免疫检查点药物研发中的核心赛道。面对抗体、双抗、多肽、小分子阻断剂等不同候选分子的筛选需求，稳定、可量化、可高通量的体外评价模型，正在成为早期研发和生产质控的重要基础。NFAT-Luc/PD-1 Jurkat报告基因细胞株可将PD-1/PD-L1通路阻断效果转化为发光读数，为药效强弱、EC50和批次一致性评价提供直接数据支撑。
一、PD-1靶点介绍
PD-1是活化T细胞表面核心免疫抑制受体。肿瘤细胞高表达PD-L1并结合PD-1后，会传递抑制信号，阻断TCR-NFAT活化通路，实现肿瘤免疫逃逸；PD-1/PD-L1抗体可竞争性阻断二者结合，恢复T细胞杀伤功能。
PD-1抑制剂已成为肿瘤免疫治疗基石，国产多款产品通过医保快速落地，国内市场高度普及，百济、信达、恒瑞、君实、康方等企业形成主力布局，部分产品实现海外上市，完成从跟随仿制走向全球化开发。在美国癌症研究协会（AACR）年会上，PD-1/PD-L1仍是备受关注的焦点，这一领域早已成为肿瘤免疫治疗的红海赛道。
二、PD-1研发工具箱：NFAT-Luc/PD-1 Jurkat细胞株
针对PD-1/PD-L1靶点药物的开发和研究需求，赛业生物开发了NFAT-Luc/PD-1 Jurkat, Clone E6-1（编号SY-RC-00003）双稳转报告基因细胞株。该细胞株可模拟肿瘤微环境中的PD-1/PD-L1免疫抑制通路，通过化学发光定量读数适配高通量筛选，是免疫检查点抗体、多肽、小分子阻断剂研发中的标准化体外评价模型。
细胞株构建逻辑以人Jurkat T细胞为底盘，双稳转两大元件：全长人源PD-1膜蛋白（PDCD1，NM_005018.3）和NFAT响应元件驱动的萤火虫荧光素酶报告基因。若项目还需要构建其它靶点或通路报告体系，也可结合报告基因细胞系与体外检测方案进行配套设计。
共培养实验完整通路流程
- 共培养体系：NFAT-Luc/PD-1 Jurkat + PD-L1+CD3 scFv CHO靶细胞。
- 基础抑制状态：CHO表面CD3 scFv激活TCR通路，PD-L1结合Jurkat PD-1后募集SHP-2磷酸酶，抑制NFAT入核，荧光素酶低表达、发光值弱。
- 加阻断抗体后：PD-1/PD-L1抗体抢先结合PD-1，阻断抑制信号，NFAT正常入核启动荧光素酶，发光强度回升。
- 药效读出：发光读数可定量对应抗体阻断活性，进一步计算EC50，直观评估药物药效强弱。
三、四大核心应用场景，覆盖PD-1药物全研发周期
- 场景1：PD-1/PD-L1抑制剂高通量筛选与药效定量评估。适配单抗、双抗、多肽、小分子阻断剂批量初筛；通过剂量效应曲线计算EC50，量化抗体阻断能力，替代不稳定原代T细胞，适配96/384孔自动化筛选平台，大幅缩短筛选周期。
- 场景2：PD-1通路机制基础研究。解析PD-1结合配体后对NFAT钙信号、T细胞活化、增殖的调控逻辑；可与空白NFAT-Luc Jurkat对照，横向对比CTLA-4、LAG-3等其他检查点通路抑制强度差异。
- 场景3：抗体药物生产批次质控与一致性检测。规避PBMC供体个体差异、批次波动问题，标准化发光检测体系可用于PD-1靶向药物中试、上市前批次活性检定，保障药效稳定、满足申报级数据要求。
- 场景4：肿瘤免疫治疗配套研究。支撑肺癌、黑色素瘤等实体瘤免疫新药开发；同时可用于多发性硬化症等自身免疫病免疫调控机制、免疫疗法模型构建。对于需要衔接体内验证的项目，可进一步结合肿瘤药效评价或相关人源化模型。
四、赛业生物报告基因细胞系质控标准
针对NFAT-Luc/PD-1 Jurkat, Clone E6-1（编号SY-RC-00003）双稳转报告基因细胞株，赛业生物提供每批次细胞全维度检测，出具完整质控报告，帮助保证实验结果可追溯、稳定可重复。
1. PD-1膜蛋白表达：流式检测验证
PD-1膜蛋白表达采用流式检测验证：空白Jurkat几乎无PD-1信号，改造后细胞PD-1阳性表达率100%，膜蛋白表达均一，保证共培养体系稳定结合PD-L1。
2. 基础通路激活验证：CD3抗体刺激
单独细胞基线发光极低；加入CD3刺激6小时后发光信号显著抬升，证明细胞TCR-NFAT通路完整，具备正常活化响应能力。
3. 抗体功能药效验证与安全质控
在抗体功能药效验证中，可采用临床药Pembrolizumab梯度处理，效靶比2:1共培养6小时，EC50=0.056 µg/mL，药物灵敏度优异；S/B=1.7，抑制/激活信号区分清晰，可精准区分不同阻断剂药效强弱。
安全质控方面，赛业逐批完成细菌、真菌、支原体三项微生物筛查；同步检测冻存复苏细胞活率，无外源污染、复苏状态稳定。完整细胞产品参数、标准化培养体系和细胞培养使用指导，也可随细胞产品配套提供。
小贴士：出厂严格无菌质控，培养过程可按需添加细胞级抗生素，不影响通路响应。
五、为什么研发PD-1抑制剂优先选这款细胞？
- 双稳转设计一步到位：同时自带PD-1与NFAT荧光报告系统，无需自行构建、筛选稳定株，节省数月建株时间。
- 模拟肿瘤共培养模型：搭配PD-L1-CD3 scFv CHO靶细胞，还原肿瘤细胞与T细胞相互作用，数据更贴合体内药效。
- 替代原代PBMC，解决行业痛点：无供体差异、可持续传代、支持高通量筛选，大幅降低实验成本与周期。
- 临床药物对标验证：采用帕博利珠单抗完成功能质控，EC50数据标准化，适配新药申报体外药效试验。
- 全套配套服务：完整操作SOP、共培养实验方案、质控原始数据同步提供，赛业生物技术团队可提供持续支持。
如果正在推进PD-1/PD-L1抑制剂、双抗或其它免疫检查点项目，也可结合抗体药物研发、细胞模型定制服务和体外功能评价体系，构建从靶点机制到候选分子活性验证的完整评价链路。
六、相关细胞株、资料与延伸阅读
更多PD-1/PD-L1体外筛选功能细胞株推荐
| 靶点 | 功能细胞株 | 货号 |
|---|---|---|
| PD-1 | NFAT-Luc/PD-1 Jurkat报告基因细胞 | SY-RC-00003 |
| PD-1 | Human PD-1 Jurkat过表达细胞 | SY-OE-00074 |
| PD-L1 | MC38-hPD-L1人源化细胞 | SY-KI-00001 |
| PD-L1 | CT26.WT-hPD-L1人源化细胞 | SY-KI-00002 |
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正在推进PD-1/PD-L1免疫检查点药物筛选或报告基因细胞株构建？可联系赛业生物获取NFAT-Luc/PD-1 Jurkat细胞与体外评价方案建议。
FAQ
NFAT-Luc/PD-1 Jurkat报告细胞主要用于什么？
主要用于PD-1/PD-L1抑制剂、抗体、多肽、小分子阻断剂的体外活性评价、高通量筛选、EC50计算、机制研究和批次一致性检测。
为什么该模型比原代PBMC更适合标准化筛选？
原代PBMC存在供体差异和批次波动，而NFAT-Luc/PD-1 Jurkat细胞为稳定细胞株，可持续传代、读数清晰，更适合高通量筛选和批次间数据比较。
PD-1/PD-L1抗体阻断活性如何在该模型中体现？
抗体阻断PD-1/PD-L1抑制信号后，NFAT可正常入核并驱动荧光素酶表达，发光强度回升。通过剂量效应曲线可进一步计算EC50。
如果需要其它免疫检查点报告细胞株，是否可以定制？
可以根据靶点、信号通路、报告系统和共培养体系需求，评估报告基因细胞系或细胞模型定制方案，搭建更适合项目的体外评价模型。
