Molecular Therapy丨髓系特异CAR敲入小鼠实现异体免疫治疗

研究背景：CAR巨噬细胞与纤维化

纤维化相关疾病（如肺纤维化和肝纤维化）由于成纤维细胞异常激活和胶原沉积，导致组织结构破坏和器官功能衰竭，目前临床上仍缺乏有效的靶向治疗手段。近年来，靶向肿瘤微环境的CAR免疫细胞治疗为实体瘤和纤维化疾病提供了新的治疗思路，其中以成纤维细胞活化蛋白（FAP）为靶点的CAR巨噬细胞（CAR-M）显示出独特优势，但其制备仍依赖体外病毒转导，限制了临床转化。

近日，沈阳医学院附属中心医院夏书月团队联合鲲石生物尹秀山团队、301医院张硌团队（第一作者为王敏、张耀扬、朱芩瑶）在Molecular Therapy杂志上发表了Myeloid lineage CAR knock-in mice enable allogeneic immunotherapy for liver and lung fibrosis的文章。该研究创新性地构建了一种可在体内直接产生CAR巨噬细胞的小鼠模型，并系统评估了其在肺纤维化和肝纤维化治疗中的疗效。

图片来源：《Molecular Therapy》

研究材料与方法

本研究体内实验核心模型为赛业生物构建的Rosa26-LSL-FAP-CAR条件性敲入小鼠（CARflox）及其配套的Lyz2-Cre小鼠。研究人员通过将CARflox小鼠与Lyz2-Cre小鼠杂交，获得了FAP-CARM小鼠，在骨髓来源单核细胞、巨噬细胞及粒细胞中实现FAP-CAR的特异性表达。

体外实验方面，研究人员使用RAW264.7巨噬细胞系、小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）、成纤维细胞系L929等，并利用腺病毒Ad5f35-FAP-CAR进行对照验证。动物模型包括博来霉素（BLM）诱导的肺纤维化模型和DDC诱导的肝纤维化模型。

本研究综合采用了多种先进的分子与细胞技术，包括小鼠基因敲入、Cre-loxP条件性基因激活体系、腺病毒转导、流式细胞术、Western blot、实时荧光定量PCR、免疫荧光、免疫组化、Masson染色及羟脯氨酸（HYP）定量等技术手段，用于系统评估FAP-CAR在巨噬细胞中的表达及其抗纤维化功能。

技术路线

研究结果

研究人员首先验证了FAP-CAR巨噬细胞在体外可特异性识别并吞噬FAP阳性的成纤维细胞，显示出明显的靶向清除能力（图1）。

图1 体外构建并验证靶向FAP的CAR-M细胞[1]

在体内，赛业构建的FAP-CARM小鼠来源的巨噬细胞（FAP-CARM-BMDMs）在肺和肝纤维化模型中表现出显著的抗纤维化作用。将 FAP-CARM-BMDMs静脉输注至纤维化小鼠后，肺组织损伤和胶原沉积明显减少，FAP阳性成纤维细胞显著下降；在肝纤维化模型中，小鼠体重下降减轻，肝脏肿大及血清ALT、胆红素和羟脯氨酸水平明显降低，同时组织学和免疫荧光结果显示FAP与α-SMA表达被明显抑制，表明CAR巨噬细胞能够有效缓解肺和肝纤维化（图2）。

图2 FAP-CARM小鼠来源的巨噬细胞移植缓解肺和肝纤维化[1]

FAP-CARM小鼠的外周血中存在大量表达CAR的单核细胞和巨噬细胞，将其全血直接输注至肺和肝纤维化小鼠后，同样显著减轻了纤维化程度。受体小鼠肺和肝组织的结构明显改善，炎症细胞浸润和胶原沉积减少，FAP和α-SMA表达显著下降，且CAR阳性细胞可在病变组织中与巨噬细胞共定位，说明通过活体供血即可获得具有治疗活性的CAR免疫细胞用于抗纤维化治疗（图3）。

图3 FAP-CARM小鼠全血输注缓解肺和肝纤维化[1]

研究结论

该研究首次证明，通过Rosa26-LSL-FAP-CAR×Lyz2-Cre体系，可以在体内直接生成具有治疗功能的CAR巨噬细胞，为纤维化疾病提供了一种全新的细胞治疗模式。这一模型不仅避免了传统CAR细胞体外改造的复杂流程，也为CAR-M在慢性疾病中的长期应用提供了可靠工具。

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参考资料

[1]Wang, M., Zhang, Y., Zhu, Q., Guan, L., Xun, Y., Liu, Y., Liu, Y., Hao, Y., Liu, S., Li, H., et al. Myeloid lineage CAR knock-in mice enable allogeneic immunotherapy for liver and lung fibrosis. Molecular Therapy. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2026.01.027.

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