CD8靶向药物临床前研究：人源化小鼠、CDX/PDX与药效评价

1. 为什么 CD8 靶向药物不能直接套用常规小鼠评价体系？

CD8 的临床前评价首先受到“物种差异”的约束。研究显示，CD8A 和 CD8B 在不同物种间的蛋白同源性处于较低至中等水平，其中人源与鼠源 CD8A 胞外域氨基酸序列一致性约为 49%，整体跨物种同源性约为 20%–60%。这些差异分布在 Ig 样结构域、铰链/跨膜区以及胞质尾区，并会影响表位识别、CD8-MHC-I 相互作用和信号传递。

更直接的问题是，很多抗 CD8 单抗具有种属特异性。如果候选分子只能识别人源 CD8，那么在野生型小鼠中出现“无结合”或“无药效”，并不能简单等同于候选分子本身无效，而可能首先说明模型没有复现药物所需要的人源靶点环境。因此，CD8 项目的模型选择必须从“候选分子到底识别哪一个物种的 CD8”开始。

图1 人/鼠 CD8A 序列比对结果示意。人鼠 CD8 胞外区差异会直接影响表位识别与抗体跨物种反应性。图源：赛业生物《CD8-全球热门抗体靶点信息库》。

1.1 从“靶点表达”到“功能重建”，CD8 模型还要回答第二层问题

即使模型能够提供人源 CD8，CD8 类药物仍然不是单纯的受体占位型项目。CD8 是 TCR 的关键共受体，其作用涉及 T 细胞激活、CD8 与 CD4 亚群选择性、细胞毒性、细胞因子释放以及肿瘤组织中的 T 细胞浸润。因此，模型不仅要允许候选分子“结合 CD8”，还要能够在相应研究问题下观察人源 T 细胞功能。

这也是为什么在 CD8 靶向药物验证体系中同时列出了靶点人源化模型、免疫系统人源化模型、肿瘤药效模型和细胞模型：它们回答的是不同层级的问题，不能彼此简单替代。

2. CD8 靶向药物临床前研究需要回答哪些关键问题？

从 AZD9793、AZD5492、IM-8319、MTX-101 与 CPTX2309 等项目的评价指标可以看出，CD8 靶向分子的临床前研究通常同时涉及“靶点识别、细胞选择性、功能输出与体内转化”四个层面。对于不同机制的候选药物，具体终点会有所不同，但可以先围绕以下问题建立研究框架。

3. CD8 靶点人源化模型：解决“药物不识别鼠源 CD8”的首要问题

本文将“靶点人源化验证”列为 CD8 药物开发的重要环节，核心用途是评估人源 CD8 特异性分子的体内结合、作用机制和药效，尤其适用于候选分子无法识别鼠源 CD8 的项目。对于这类分子，人源化靶点模型的价值首先在于建立一个能够被候选药物识别的体内靶点环境。

但需要注意，靶点人源化主要解决“人源 CD8 是否可被候选分子正确识别和调控”的问题。如果研究目标进一步涉及完整的人免疫细胞组成、CD8/CD4 选择性、细胞因子释放或人源 T 细胞介导的肿瘤杀伤，就需要继续引入免疫系统人源化模型。

4. 免疫系统人源化模型：观察真正的人源 CD8 T 细胞功能

免疫系统人源化模型应用场景包括 CD8+ T 细胞激活、CD8/CD4 比值、细胞因子释放和肿瘤浸润等关键指标。也就是说，当药物机制本身依赖人源 T 细胞的选择性激活或调节时，仅有“人源 CD8 靶点”还不够，还需要能够在体内观察人源免疫细胞的动态变化。

4.1 CD8 偏向性 TCE：同时看药效与“激活范围”

AZD9793 的临床前研究体现了这一点。研究显示，该分子在多种 GPC3 阳性 HCC 细胞系中表现出 T 细胞依赖性杀伤，并通过 CD8/TCR 结合优先激活 CD8+ T 细胞；在人源化小鼠 HCC 异种移植模型中，研究不仅观察肿瘤控制，还同时检测 TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-10、IL-2 和 IL-17A 等系统性细胞因子，并分析肿瘤内 T 细胞浸润与 CD8/CD4 比值。

AZD5492 也采用 NSG 人源化小鼠评价 B 细胞肿瘤中的药效和系统性细胞因子水平。对这类 CD8-biased TCE 来说，“肿瘤是否缩小”只是一个终点，是否真正实现 CD8 偏向而没有伴随过度 CD4 激活，同样属于机制验证的一部分。

4.2 PBMC 重建与 CD34+ 人源化体系在研究中的应用实例

IM-8319 在 Raji 细胞接种并重建人 PBMC 的异种移植小鼠模型中进行体内验证，重点观察肿瘤抑制以及 CD8+ T 细胞耗竭。MTX-101 则在移植人 PBMC 的急性 GVHD NSG 模型中评价疾病进展、促炎细胞因子和 CD8 Treg 功能，并进一步在 CD34+ NSG-Tg(Hu-IL15) 人源化小鼠中进行多次给药与早期安全性研究。

这些案例说明，模型类型应由机制问题驱动：当项目关注成熟人 T 细胞的即时功能、免疫调节或肿瘤杀伤时，文档中已有 PBMC 重建模型的应用；当项目需要观察较长期的人源免疫重建背景或进行多次给药研究时，文档中也给出了 CD34+ 人源化模型的实际使用案例。

图2 MTX-101 在 CD34+ NSG-Tg(Hu-IL15) 人源化小鼠中的早期安全性与免疫表型评价示意。同时观察 CD8 Treg、CD4 T 细胞、NK 细胞及生存等指标。图源：赛业生物《CD8-全球热门抗体靶点信息库》。

5. CDX、PDX 与人源化免疫系统：如何承接 CD8 靶向药物的肿瘤药效？

本文将 CDX、PDX 以及人源免疫系统重建肿瘤模型列入 CD8 靶向药物的体内药效评价体系。对于 CD8 依赖型分子，肿瘤模型需要与免疫背景协同考虑：肿瘤细胞或患者来源肿瘤负责提供目标抗原与肿瘤异质性，而人源免疫系统负责提供药物真正需要调动的效应细胞。

5.1 CDX：适合观察可控背景下的体内杀伤与剂量效应

本文中的 AZD9793、AZD5492、IM-8319 与 CPTX2309 均使用了异种移植肿瘤体系进行体内药效验证。例如，IM-8319 在 Raji + 人 PBMC 异种移植模型中观察肿瘤抑制与 CD8+ T 细胞状态；CPTX2309 则在 Nalm6 白血病异种移植模型中评价体内工程化 CD8+ T 细胞后的肿瘤控制。

5.2 PDX：在肿瘤异质性问题上提供补充信息

AZD9793 的研究进一步使用 PDX 模型评价 GPC3 异质性表达肿瘤，并结合旁观者杀伤效应进行验证。这类设计说明，当候选药物的疗效可能受到靶抗原表达异质性影响时，仅在均一表达的细胞系模型中得出结论并不充分，患者来源肿瘤模型可以补充不同表达背景下的体内信息。

6. 体外功能与跨物种反应性：进入动物实验前应先把哪些问题做清楚？

本文中，“细胞模型与交叉反应性”被单独列为 CD8 药物开发验证的一环。通过构建人源、鼠源和食蟹猴源的靶点表达体系，可以支持抗体筛选、药物评估和物种交叉反应性测试。对 CD8 项目来说，这一步不仅有助于确定后续动物模型，还能帮助判断候选分子是否存在可用于转化研究的跨物种结合。

6.1 结合之外，还应同步观察功能输出

文档中的多个代表性项目均在体外阶段加入了功能读数：AZD9793、AZD5492 和 IM-8319 使用 T 细胞或 PBMC 体系观察靶细胞杀伤、CD8/CD4 激活和细胞因子；MTX-101 在患者来源 PBMC 中观察 CD8 Treg 的颗粒酶 B、Helios 与致病性 CD4 T 细胞清除；CPTX2309 则在非激活人源 CD8+ T 细胞中检测 CAR 表达，并评价自体 B 细胞与 CD19+ 肿瘤细胞清除。

因此，对 CD8 候选分子而言，体外筛选最好不要只停留在“有无结合”，而应尽早把结合、细胞选择性、杀伤或免疫调节以及细胞因子等功能终点串联起来，为后续体内模型选择提供依据。

7. CD8 靶向 LNP / in vivo CAR-T：模型终点从“给药”扩展到“体内工程化”

CPTX2309 代表了与传统抗体药不同的一类 CD8 靶向路径：利用表面偶联的人源化 CD8 抗体将 CAR mRNA LNP 优先递送至 CD8+ T 细胞，并直接在体内完成 CAR-T 细胞工程化。由于药物的关键过程发生在体内，评价终点也需要覆盖“递送—表达—效应”完整链路。

研究显示，在 NSG 人源化小鼠中，单次静脉给药后可在 24 小时内检测到 CAR+CD8+ T 细胞并观察 B 细胞清除；在 CD34+ 人源化小鼠中，多次给药可观察持续的 B 细胞耗竭；在 Nalm6 白血病模型中则进一步评价肿瘤控制。由此可见，这类项目的临床前研究不能只用终末肿瘤体积作为唯一指标，还需要把目标细胞工程化效率与后续功能效应连接起来。

图3 CPTX2309 在 CD34+ 人源化小鼠与 Nalm6 肿瘤模型中的研究示意，将 B 细胞清除与肿瘤控制结合评价。图源：赛业生物《CD8-全球热门抗体靶点信息库》。

8. 基于药物机制，CD8 项目可以如何选择临床前评价体系？

基于研究中不同候选项目已经使用的模型和赛业生物给出的验证体系，可以将 CD8 项目的模型选择整理为以下思路。需要强调的是，实际方案仍应根据候选分子的靶点组合、物种反应性、适应症和具体研究终点进行调整。

9. 赛业生物可如何承接 CD8 候选药物从体外到体内的验证？

研究中已经给出了从抗体发现到体内外验证的完整路径。对于已经进入候选验证阶段的 CD8 项目，可以将赛业生物的能力拆分为“多物种细胞—靶点人源化—免疫系统人源化—肿瘤药效”四个连续层级，并根据项目需要向上游延伸到全人源抗体发现与计算优化。

9.1 多物种细胞模型：先解决结合谱与交叉反应性

可建立人源、鼠源与食蟹猴源 CD8 或其他协同靶点表达体系，用于抗体筛选、药物评价和跨物种反应性测试。对于双抗和多抗项目，还可结合不同靶点表达背景设计细胞层面的功能验证。

9.2 靶点人源化：承接 human-specific CD8 分子的体内研究

当候选分子不能识别鼠源 CD8 时，可使用靶点人源化模型评价人源 CD8 特异性分子的体内结合、作用机制与药效，避免因种属不匹配导致结果难以解释。

9.3 免疫系统人源化：把 CD8/CD4、细胞因子与肿瘤浸润纳入同一研究

针对依赖人源 T 细胞功能的 CD8-biased TCE、多特异性抗体、CD8 Treg 调节剂和体内 CAR-T，可通过免疫系统人源化模型观察 CD8+ T 细胞激活、CD8/CD4 比值、细胞因子以及肿瘤浸润等关键指标。

9.4 CDX / PDX / 人源免疫系统重建肿瘤模型：完成体内药效闭环

肿瘤药效评价可进一步连接 CDX、PDX 及人源免疫系统重建肿瘤模型，观察 CD8 靶向药物在不同肿瘤背景下的抗肿瘤效应，并与免疫细胞变化和细胞因子数据相互印证。

9.5 上游延伸：HUGO-Ab^® 与 AbSeek^®

如果项目仍处于候选分子发现或工程化阶段， HUGO-Mab^® 可用于全人源单抗发现，HUGO-Light^™ 可承接双特异性/多特异性抗体开发，AbSeek^® 则覆盖抗体序列分析、结构预测、亲和力优化与免疫原性评估等环节。由此可以形成从靶点立项、抗体发现到体外功能和体内药效验证的连续研发路径。

图4 赛业生物全人源抗体开发与验证流程示意，覆盖靶点验证、抗体筛选、AI 赋能开发、体外功能、体内药效及 IND 支持。图源：赛业生物《CD8-全球热门抗体靶点信息库》。

10. CD8 临床前研究中值得避免的几个常见误区

误区一：human-specific 分子直接用野生型小鼠解释药效

如果候选分子不识别鼠源 CD8，野生型小鼠中的阴性结果首先需要排除种属不匹配，而不是直接归因于候选药物无活性。

误区二：只看肿瘤体积，不看 CD8/CD4 与细胞因子

CD8-biased TCE 的价值不仅在于是否抑瘤，还在于能否体现预期的 CD8 偏向性并控制广泛 T 细胞激活。因此，CD8/CD4 比值、T 细胞浸润和细胞因子等指标应与药效共同解释。

误区三：体外杀伤强，就默认体内机制已经成立

体外 PBMC 或 T 细胞实验可以支持机制筛选，但体内还要面对免疫细胞分布、肿瘤异质性和系统性细胞因子等问题。文档中多个项目均同时使用体外功能与人源化体内模型进行验证。

误区四：忽视跨物种反应性，直到后期才处理

CD8 人鼠差异本身就是模型选择的重要前提。尽早建立人、鼠和食蟹猴靶点表达体系，有助于在候选阶段就明确后续模型与转化研究的可行性。

11. 总结

CD8 靶向药物的临床前研究本质上是一个“机制匹配模型”的过程。CD8 靶点人源化用于解决 human-specific 分子的体内识别问题；免疫系统人源化模型用于观察人源 CD8+ T 细胞激活、CD8/CD4 选择性、细胞因子和肿瘤浸润；CDX/PDX 等肿瘤模型负责承接最终药效与肿瘤异质性；人/鼠/食蟹猴细胞体系则将跨物种反应性前置到候选筛选阶段。对于 CD8-targeted LNP 和 in vivo CAR-T 等新型路线，评价终点还进一步扩展到体内递送、CAR 表达和免疫细胞清除。

因此，CD8 项目的关键并不是选择“最复杂”的模型，而是明确候选分子当前最需要回答的问题，再用靶点、人免疫系统和疾病背景逐层增加复杂度。这样的验证路径既有助于提高结果可解释性，也更便于把体外机制、体内药效与后续转化研究连接起来。

推荐资料与研究入口

参考资料

1. Srinivasan S, Zhu C, McShan AC. Structure, function, and immunomodulation of the CD8 co-receptor. Front Immunol. 2024;15:1412513.

2. AZD9793 相关临床前资料：JITC 2024 supplemental abstract；AACR 2025 abstract；AstraZeneca Oncology Pipeline.

3. AZD5492 相关临床前资料：Blood 2024 Supplement；AstraZeneca Oncology Pipeline.

4. IM-8319 相关资料：JITC 2023 Supplement；AACR 2024 abstract.

5. Gardell JL, et al. Preclinical characterization of MTX-101: a novel bispecific CD8 Treg modulator that restores CD8 Treg functions to suppress pathogenic T cells in autoimmune diseases. Front Immunol. 2024;15:1452537.

6. Hunter TL, et al. In vivo CAR T cell generation to treat cancer and autoimmune disease. Science. 2025;388(6753):1311-1317.

页面标签

FAQ：CD8研究中的常见问题