中国药科大学/鼓楼医院团队合作发现中性粒细胞P2Y14R是防治静脉血栓的潜在新靶点

本研究整合临床分析、动物模型与分子机制探讨，系统评估P2Y₁₄R在静脉血栓形成中的作用。首先，通过分析GEO数据库中VTE患者基因表达数据及临床样本流式检测，验证P2Y₁₄R在患者中性粒细胞中的表达上调。在动物层面，利用全身性P2Y₁₄R基因敲除小鼠，构建下腔静脉狭窄与LPS诱导的微栓塞模型，观察血栓形成与NET释放情况。为明确细胞特异性机制，研究采用赛业生物提供的CD68-P2A-iCre工具鼠与P2Y₁₄R-flox小鼠杂交，获得单核/巨噬细胞特异性P2Y₁₄R敲除小鼠模型，排除了该细胞类型在表型中的主要作用。机制上，通过转录组与磷酸化蛋白质组学分析、免疫荧光、G-LISA等技术，揭示P2Y₁₄R通过PKA/AKAP13/RhoA信号轴调控细胞骨架重排与NET释放。最后，运用高通量分子对接筛选P2Y₁₄R抑制剂，并在体内外验证其抗血栓活性与安全性。

研究团队首先通过GEO数据分析发现VTE患者外周血P2Y₁₄R表达显著升高，并在患者外周血和血栓组织中进一步验证了这一结果。为明确P2Y₁₄R在静脉血栓形成中的作用，作者构建了全身性及细胞特异性P2Y₁₄R缺失小鼠模型，分别通过下腔静脉狭窄术诱导深静脉血栓，以及注射LPS诱导肺栓塞。在两种血栓模型中，P2Y₁₄R缺失均减轻了小鼠静脉血栓负荷、改善肺部微循环，并抑制了NET释放。

P2Y₁₄R在多种血细胞中均有表达，究竟是谁在“主导”致病？这是机制研究的关键。为此，研究团队利用赛业生物提供的CD68-P2A-iCre小鼠与P2Y₁₄R-flox小鼠进行杂交，构建了单核/巨噬细胞特异性P2Y₁₄R敲除小鼠。有意思的是，特异性敲除单核/巨噬细胞中的P2Y₁₄R，并未对血栓形成产生显著影响（图1）。随后的研究进一步排除了血小板和内皮细胞的作用。最终，通过一系列精巧的体内外实验，研究团队将目标精准锁定在了中性粒细胞——证明中性粒细胞上的P2Y₁₄R才是驱动NET释放和静脉血栓形成的核心环节。在这一过程中，赛业生物的特异性敲除模型为排除干扰、精准结论提供了关键的技术支撑。

图1 利用特异性敲除模型精准定位目标细胞^[1]

随后作者利用磷酸化蛋白组学解析了P2Y₁₄R缺失减轻NET形成的机制，并进行了体外验证。结果显示，P2Y₁₄R缺失通过PKA/AKAP13/RhoA信号轴抑制中性粒细胞细胞骨架重排以及细胞表面PSGL-1簇状分布，进而减少了中性粒细胞-血小板相互作用以及随后的NET释放。

接下来，作者试图寻找一种安全有效的P2Y₁₄R抑制剂可用于防治静脉血栓形成。通过虚拟筛选结合实验验证，作者从老药新用数据库中发现已上市药物丙谷胺具有良好的P2Y₁₄R抑制活性和结合亲和力，体外活性验证结果显示丙谷胺显著抑制血小板诱导NET释放。基于此，作者在上述两种血栓模型中评估了丙谷胺的药效，发现丙谷胺能显著抑制NET和小鼠血栓形成，同时改善全身炎症反应。更重要的是抑制P2Y₁₄R不会引起小鼠出血风险增加，也不会干扰血小板聚集能力。