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实际电泳条带与目的带大小不符的原因和解决方法

原因1-信息传递错误,产物大小错误

解决措施:核对序列文件、引物信息、测序结果等,确认正确的产物大小;

 

原因2-跑胶问题、Marker质量问题

解决措施:调整凝胶浓度、电泳条件等条件重新跑胶,更换其他品牌的Marker;

 

原因3-污染问题:DNA污染、体系污染、PCR产物污染

解决措施:重提DNA,换新试剂重新PCR;

 

原因4-引物特异性不足;酶的保真度不够或对复杂模板扩增效率低

解决措施:重设特异引物;使用不同品牌或不同特性的酶(如将Taq换成高保真酶,或换成热启动酶)重复PCR,观察条带是否改善。

 

原因5-数据库序列更新,动物品系差异(常见于大鼠品系)

解决措施:更新数据库,重新设计引物,必要时可测序验证特殊品系等。

 

 

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