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非特异性条带出现的原因和解决方法

示例:非特异性条带,除目的条带外,存在其他非特异性扩增的产物,可能影响结果判定

 

 

非特异性扩增是指在‌PCR反应中扩增出与预期大小不一致的杂带或弥散带‌的现象,一般是引物非特异结合的结果。如果非特异条带与目的带大小接近或者导致目的带变弱或缺失,那么需要及时解决这个问题。

 

原因1-引物特异性差

解决措施:重新设计PCR引物。

 

原因2-PCR反应程序或者体系问题

解决措施:提高退火温度,减少3-5循环或者换降落程序;适当降低引物用量;稀释DNA模板后再使用;酶的效率太强也会导致容易扩增出非特异带,可以考虑更换合适的酶。

 

原因3-配制PCR体系时环境温度过高,或配制完成到 PCR仪反应间隔时间过久

解决措施:在冰浴环境下配制PCR反应体系,完成后尽快放入PCR仪中开始反应。

 

原因4-含有特殊序列(如重复片段、高GC)

解决措施:避开特殊序列重新设计PCR引物。在无法避开特殊序列,非特异带并不与理论带太接近,理论带亮度不受影响,不影响鉴定结果的判断的情况下,不必担心这些非特异带的存在。

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