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常见点突变小鼠如何鉴定?

点突变由于只是单碱基或少数碱基的增加、缺失或替换,在电泳图上突变片段与野生型条带的大小绝大多数是无法区分的。因此只用PCR是无法鉴定的,还需要结合测序或者酶切来鉴定。

 

  1. 引物设计

     

  2. 预期片段大小及电泳结果

    使用F/R扩增,条带1为野生及阳性的条带,扩增产物用F或R做测序引物进行测序。

     

  3. 测序结果

    纯合子:靶位点测序峰图为目的突变单峰。

    杂合子:靶位点测序峰图为目的突变峰及野生型峰图双峰。

    野生型或其他阴性:靶位点测序峰图为野生型或其他峰,无目的突变峰。

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