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构建基因编辑鼠的全流程是什么?

1)确认技术方案,确认好后确认打靶方案,是KO/CKO/KI/mu等。

 

2)准备打靶使用的物料,根据不同的路线会存在不一样,但是基本都要有 打靶载体、编辑用酶、sgRNA(仅Cas9编辑需要)。

 

3)显微注射(受精卵)或电转(ES细胞/受精卵):

 

路线一:注射受精卵-移植代孕鼠-小鼠出生送鉴定-保留阳性小鼠-小鼠分笼-性成熟小鼠安排配繁传代-新生F1代小鼠送鉴定-小鼠分笼-小鼠交付;

 

路线二:电转ES细胞-细胞鉴定-阳性细胞囊胚注射-F0小鼠出生鉴定-小鼠分笼-性成熟小鼠安排配繁传代-新生F1代小鼠送鉴定-小鼠分笼-小鼠交付;

 

两种路线最终都是拿到正确的F1代小鼠

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内源基因位点敲入方案,外源基因敲入的同时是否保留内源基因功能?
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