常见问题
多类型常见问题解答
提高外源基因表达量的一般策略？
1）优化繁殖或构建策略：
①由杂合子繁育到纯合子；
②内源基因位点修饰调整为安全位点修饰，通过增加外源基因拷贝数的方式提高表达；
③定点敲入调整为转基因策略；
④调整外源基因插入位置：N-terminal→C-terminal, C-terminal→N-terminal。
2）优化表达框
①Promoter：更换强启动子；添加enhancer；保留尽量多的上游基因组序列；
②ORF：CDS前添加Kozak；CDS密码子优化；增加CDS终止密码子数量；使用更亮的荧光蛋白变体；增加CDS拷贝数；调整蛋白连接linker；
③PolyA：添加WPRE；保留GOI内源3’UTR。
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