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多类型常见问题解答
AAV病毒包装过程
赛业通常使用三质粒系统包装重组AAV病毒。该系统包括一个携带目的基因的质粒(GOI质粒)、一个Rep-Cap表达质粒(RC质粒)以及一个表达腺病毒基因(E2、E2A等)的辅助质粒(pHelper质粒),将三种质粒共转染到HEK293T细胞中。细胞经48-72小时培养后,根据血清型的不同,收集上清或者细胞裂解液,全能核酸酶处理去除宿主细胞基因组及残留质粒,再通过碘克沙醇密度梯度离心或者亲和层析对病毒颗粒进行纯化,超滤管多次洗滤浓缩,最后通过超滤以及0.22μm滤膜过滤除菌,然后分装至病毒保存管,-80℃保存。
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