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基因编辑鼠如何建系?

类型:完全性基因敲除、基因敲入(点突变)鼠如何建系?

F0代与野生鼠互配获得F1代杂合子,F1代杂合子互配得到F2代纯合子。

区别:

1. 转基因

转基因项目具有插入位点及拷贝数不确定的特点,获得的F0代鼠可能各不相同,F0代不能相互交配。需要将F0与野生型多传几代,待基因型稳定后通过其他实验手段筛选出优先传代的品系继续繁殖。

 

2. 基因编辑技术构建的完全性基因敲除、基因敲入(点突变)

基因编辑技术构建的F0代阳性鼠由于切割效率和非同源修复可能会出现不同的line,需要与野生型鼠交配获得稳定基因型的F1代阳性鼠。不同line的后代同样不建议相互交配。

 

类型二:条件性敲除(敲入)鼠如何建系?

F0代与野生鼠互配获得F1代杂合子,F1代杂合子(flox/+)互配得到F2代纯合子(flox/flox),F2代纯合子(flox/flox)与全身/组织特异性工具鼠交配获得F3代(flox/+,cre),F3代(flox/+,cre)互配得到F4代(flox/flox,cre),

CKO纯合子,同样CKI纯合子也可以按照以上方式进行配繁获得。

条件性的项目需要与全身/组织特异性工具鼠交配达到目的,所以在繁殖过程中可根据全身/组织特异性工具鼠自身的特点安排繁殖。

备注:

1. 如果是通过打靶构建的全身/组织特异性工具鼠,要注意选择与目的基因不在同一条染色体上,以免繁殖不到CKO/CKI纯合子。

2. 有生殖细胞泄露风险的Cre工具鼠,繁殖时按照建议性别选择不同基因型鼠。

3. 诱导型的Cre工具鼠,需要加药后才能实现特异组织删除。

4. F1代若有剩余的flox杂合鼠(flox/+),或想要加快获得目标鼠,第2步可以用flox/+直接配Cre工具鼠,可缩短一代周期。

5. 即使是组织特异性工具鼠,也可能在其他组织有泄露表达的风险。

 

 

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