Gut
ISG15通过ISGylation修饰CREB1抑制TGFβ2/SMAD2信号通路调控肝星状细胞活化和肝纤维化
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该研究揭示了ISG15在肝纤维化中的新型调控机制，为肝纤维化的靶向干预提供了从基因编辑到小分子抑制剂的多层次实验设计参考。
文献概述
本文《ISG15 deficiency in hepatic stellate cells promotes TGFβ2-induced liver fibrosis by counteracting CREB1 ISGylation》，发表于《Gut》杂志，系统探讨了干扰素刺激基因15（ISG15）在肝星状细胞（HSC）活化及肝纤维化进展中的作用。通过多种动物模型和分子机制研究，作者发现ISG15在纤维化肝脏中表达下调，并通过调控CREB1的ISGylation修饰抑制TGFβ2/SMAD2信号通路，从而限制HSC的激活和细胞外基质沉积。该研究不仅拓展了对肝纤维化分子机制的理解，也为开发靶向ISG15-CREB1轴的治疗策略提供了理论依据。背景知识
肝纤维化是慢性肝损伤后伤口修复失衡的关键阶段，若未加干预可进展为肝硬化甚至肝细胞癌，具有高死亡率。目前临床上缺乏有效逆转纤维化的药物，治疗仍以病因控制为主。肝纤维化的核心细胞事件是HSC从静息态向肌成纤维细胞的转分化，伴随α-SMA和胶原蛋白的大量表达。尽管TGFβ1已被广泛研究为促纤维化因子，但其系统性抑制存在严重免疫副作用，促使研究者探索其他亚型如TGFβ2的特异性调控机制。
现有研究瓶颈在于：1）TGFβ2的转录调控机制尚不明确；2）ISG15在非免疫细胞中的功能研究较少；3）如何特异性靶向HSC活化通路而不影响全身稳态仍是挑战。本研究的切入点在于发现ISG15在HSC中特异性下调，并提出其通过共价修饰CREB1抑制TGFβ2转录的新机制，为开发精准抗纤维化策略提供了新靶点。
研究方法与核心实验
研究采用多种肝纤维化模型，包括四氯化碳（CCl4）注射、胆管结扎（BDL）手术以及代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎（MASH）饮食诱导的小鼠模型，结合HSC特异性ISG15敲除小鼠（ISG15cKO）进行体内功能验证。通过单细胞RNA-seq分析人和小鼠肝脏样本，明确ISG15在活化HSC中显著下调。利用原代HSC培养系统模拟体外激活过程，并结合CRISPR/Cas9、shRNA和siRNA技术构建不同ISGylation水平的细胞模型，验证ISG15对HSC增殖、活化和ECM生成的影响。
机制上，作者采用免疫共沉淀-质谱（IP-MS）、ChIP-qPCR、双荧光素酶报告基因和表面等离子共振（SPR）等技术，系统解析ISG15与CREB1的相互作用及其对TGFβ2启动子活性的调控。通过构建ISGylation缺陷型突变体（ISG15AA）和CREB1定点突变体（K304/305R），进一步确认ISGylation修饰的具体位点与功能关系。最后，使用CREB1特异性抑制剂666–15进行体内药效验证，评估其对ISG15缺陷小鼠纤维化的缓解作用。关键结论与观点
研究意义与展望
该研究首次建立了ISG15-CREB1-TGFβ2信号轴在肝纤维化中的功能联系，突破了传统聚焦于TGFβ1的研究框架，为靶向特定TGFβ亚型提供了新思路。在药物开发层面，靶向CREB1的抑制剂（如666–15）具有较高的转化潜力，尤其适用于ISG15表达降低的患者群体。
在临床监测方面，检测肝组织或循环中ISG15水平可能有助于评估纤维化进展风险。此外，该机制在其他器官纤维化（如肺、肾）中的保守性值得进一步探索，可能推动跨器官抗纤维化策略的发展。
结语
本研究系统阐明了ISG15在肝星状细胞中通过ISGylation修饰CREB1以抑制TGFβ2转录，从而负调控肝纤维化进程的分子机制。这一发现不仅揭示了ISG15作为内源性抗纤维化因子的新功能，也提出了CREB1/TGFβ2轴为潜在治疗靶点。从实验室到临床，该通路为开发基于HSC特异性干预的精准治疗策略提供了理论基础。例如，利用小分子抑制剂靶向CREB1活性，可能避免全身性TGFβ抑制带来的副作用。同时，ISG15表达水平可作为肝纤维化进展的生物标志物，助力早期诊断与预后评估。未来研究可进一步探索激活ISG15表达的上游信号或开发稳定ISGylation修饰的化合物，推动从机制研究向临床转化的跨越，最终改善肝纤维化患者的长期预后。
