两阶段激光诱导小鼠视网膜下纤维化模型

视网膜下纤维化（SRF）是一种以视网膜下异常纤维组织（主要为胶原）积聚为特征的病理状态。这种瘢痕形成会进行性损害感光细胞、视网膜色素上皮（RPE）和脉络膜毛细血管，最终导致不可逆的中心视力丧失。SRF通常发生于新生血管性年龄相关性黄斑变性（nAMD）和息肉状脉络膜血管病变（PCV）的晚期阶段，是影响长期视力预后的主要决定因素。目前临床尚缺乏有效的抗纤维化治疗手段，可靠的临床前模型对于机制研究和药物评价至关重要。

两阶段激光诱导小鼠视网膜下纤维化模型介绍

两阶段激光诱导模型是目前模拟视网膜下纤维化病理过程的经典实验方法。该模型通过首次激光打击（D0）诱导局部损伤和持续性炎症反应，再通过第二次激光打击（D7）进一步促进纤维组织增殖，最终形成稳定的纤维化瘢痕。与传统的单次激光诱导CNV模型相比，两阶段激光模型具有突出优势：更可靠地模拟临床SRF的慢性进展过程、纤维化病变面积更大、纤维化标志物表达更高、病理特征更稳定持久。该模型通过FFA、OCT、qPCR及免疫荧光多维度验证，在结构影像、基因表达、蛋白表达三个层面均证实了纤维化病理特征的成功构建，是研究视网膜下纤维化发病机制及评估抗纤维化疗法的理想体内实验平台。

两阶段激光诱导小鼠视网膜下纤维化模型数据

图1. 视网膜下病变的荧光血管造影（FFA）及光学相干断层扫描（OCT）特征。本研究设三组：未处理对照组、激光诱导CNV组（D0单次激光）、两阶段激光诱导纤维化组（D0及D7两次激光）。FFA图像显示，两阶段激光模型各时间点（D7、D14、D21）病变面积均显著大于传统激光CNV模型。OCT图像显示，两阶段激光模型各时间点视网膜病变面积均显著大于单次激光诱导CNV模型。

图2. 两阶段激光模型诱导纤维化相关基因表达。qPCR分析显示，激光处理后第14天，两阶段激光模型组视网膜中COL-1、α-SMA表达水平较对照组显著升高，RPE/脉络膜中纤连蛋白（fibronectin，FIB）表达水平显著升高。第21天，两阶段激光模型组视网膜中COL-1、FIB、α-SMA表达水平均较对照组显著升高。数据以平均值±标准误表示,*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001。

图3. 激光诱导CNV模型及视网膜下纤维化模型中纤维化与血管变化的免疫荧光分析。RPE/脉络膜铺片免疫荧光染色显示，传统激光诱导CNV模型及两阶段激光模型在D14及D21均可检测到COL-1⁺、α-SMA⁺及IB4⁺病变，但两阶段激光诱导模型各时间点病变面积均显著大于传统激光诱导CNV模型，表明其更稳定的纤维化诱导效果。