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膜蛋白提取的注意事项?

a. 提取前先查阅下膜蛋白的基本信息,如:看下是细胞膜蛋白还是细胞器膜蛋白,膜蛋白在待测组织的表达情况等;

b. 常规方法提取膜蛋白时,大部分膜碎片很容易被离心沉淀掉,最好使用专用且高得率膜蛋白提取试剂盒,单独对膜进行裂解提取;

c. 一般膜蛋白表达量都相对较低,可以增加提取蛋白的初始样本量,如果提取的浓度太低,最好进行富集处理;

d. 提取膜蛋白时,最好进行下预实验,摸索一下最适条件,如:提取样本量,提取方式,变性条件等。

e. 如果是常规蛋白沸水浴变性10min,没有任何影响。对于多重跨膜的蛋白尽量不要煮沸操作,由于膜蛋白疏水特性,在沸水浴时,很容易聚集沉淀掉;我们有尝试过50℃和70℃变性10min,效果可以的。当然37℃变性半小时,效果也可以。

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