1、如果是单纯的实验重复

a.首先保证蛋白提取的质量（完整性好，纯度高，蛋白浓度测定准确），同一个样本需要多次实验时，尽量一次多变性一些，防止保存过程中，反复冻融导致的降解；

b.制胶时要选择合适的分离胶浓度，保证各组分充分混匀；

c.规范实验操作及所使用的耗材，保证上样量均一。可以少取点样本，用考马斯亮蓝验证下各泳道上样量是否均一；

d.控制好电泳和转膜条件，可用丽春红染色验证下转膜效率；

e.电泳结束立即转膜，防蛋白在凝胶扩散，实验用到的尼龙膜也尽量使用相同批次的；

f.电泳液及转移液要每次更换；

g.抗体尽量不要回收利用，尽量用相同批次的抗体。

h.合理控制各实验环节条件：如电压大小，电泳时间，转膜电流及时间，封闭时长，抗体稀释比例，孵育条件，洗膜时间等。

2、如果是生物学重复，在做好上面操作的同时，多检测一些样本，看趋势，减少个体差异的影响。