首先说明：BCA法浓度测定，标曲R2接近1只能证明标准曲线制作及浓度测定操作没有问题。无法客观反映蛋白的提取质量。比如：没法说明提取的蛋白没有降解，即便个别样本有降解，BAC浓度测定是看不出来的。内参不齐可能的原因及对策：

a.提取的蛋白样本不纯定量不准确或提取的个别蛋白样本有降解。重新提取蛋白，尽量避免污染和蛋白降解，重新定量。对于长期保存的蛋白样本避免反复冻融；

b.内参抗体选择不合理：如GAPDH不适合作为肿瘤或代谢相关疾病组织蛋白表达量的内参，需根据理论信息选择合适的内参；

c.变性或上样时实验操作误差（如：耗材质量差）导致上样量不准确，各泳道信号差异大。规范化操作；

d.如果使用的变性剂含有SDS的，变性后的蛋白样本点样前最好不要置于冰上放置。另外，低温取出的变性样本点样前，最好置于室温充分溶解混匀后再上样。防止低温条件下SDS有析出，导致不同样本实际蛋白的有效含量有差异；

e.制胶的问题，点样后有漏孔；重新制胶，组装电泳装置前仔细观察凝胶有无明显异常；

f.上样体积过大，点样后样本有溢出。增加上样浓度，减少上样体积；

g.电泳条带有边缘效应，导致两边条带亮弱差异大。可能的原因电泳参数设置不当，如电压过大导致边缘泳道条带迁移速率不同。或是上样时，未用变性液平衡一下含样本泳道相邻的胶孔，导致边缘效应。设置合理的电压条件，并对相邻的泳道进行平衡；

h.转膜时，个别样本条带位置有气泡。尽量用玻璃棒赶出气泡，同时，转膜后可染一下丽春红，看看转膜效果。