一、KO细胞的策略
基因敲除（KO）细胞的构建主要有两种策略：移码敲除和片段敲除（含单个外显子敲除）。以下是这两种策略的具体介绍：

移码敲除：选择一条引导分子在编码基因的外显子上切割产生DSB（双链断裂），通过NHEJ非同源性末端修复导形成非3倍数的插入或者缺失，则会造成蛋白翻译时的读码框移码（Framshift），不再产生完整的蛋白。

片段敲除：选择一对引导分子同时作用造成两个DSB时，NHEJ修复不仅可造成染色体DNA片段缺失，同时也可能造成缺失后的蛋白读码框移码。小片段敲除除了要考虑敲除的片段区域之外，也要考虑敲除的区域能否引起移码突变。

二、我们的优势
在评估两种策略均能取得不错KO效果的情况下，我们会优先选择移码敲除的方式，因为相比片段敲除，移码敲除具有更高的效率，可以让客户更快地拿到KO细胞。当然，如果客户坚持使用片段敲除，我们也可以满足需求。

对于移码敲除策略，我们的具体操作流程和优势如下：

• 多条引导分子设计：我们会设计3条引导分子分别转染细胞，以确保有足够的选择余地。

• 切割效率检测：在细胞池（cell pool）阶段，通过测序检测每条引导分子的切割效率，选择效率最高的一条引导分子进行后续实验。

• 确保敲除效果：通过优化引导分子设计和实验流程，确保基因敲除的效果和细胞株的稳定性。

此外，我们还提供以下增值服务：

• Western Blot验证：通过Western Blot检测目标蛋白的表达水平，确保基因敲除效果。

• 功能实验：设计并执行功能实验，如细胞增殖、迁移、侵袭等实验，验证基因敲除对细胞功能的影响。

• 个性化服务：根据客户的具体需求，提供定制化的基因编辑方案和技术支持。

通过以上策略和优势，我们能够为客户提供高效、可靠的基因敲除细胞株构建服务，满足不同研究和应用需求。