如果包装出来的慢病毒(LV)感染细胞效率低,可能由多种因素导致,以下是具体原因及解决方法:
1. 细胞类型
有些细胞本身就较难被感染,如某些原代细胞、干细胞系等,其表面的受体表达水平低,会影响慢病毒与其结合,进而降低感染效率。
解决方法:
• 加大病毒量:适当增加病毒的感染复数(MOI),即增加病毒颗粒与细胞的比例。
• 采用浓缩病毒:通过超速离心、PEG沉淀等方法浓缩病毒,提高病毒滴度。
2. 细胞生长状态
感染细胞前,细胞的生长状态和密度对感染效率影响很大。细胞膜的流动性、与细胞表面的接触面积及表面受体的表达丰富程度等均会影响病毒感染细胞的效果。
解决方法:
• 保证细胞良好生长状态:确保细胞处于对数生长期,细胞状态良好,无污染。
• 调整细胞密度:根据细胞类型和实验需求,调整细胞密度至最佳感染密度。
3. 病毒质量
包装出来的LV应尽量避免冻融,反复冻融会降低病毒的滴度(每次约降低5%10%)。
解决方法:
• 避免反复冻融:分装保存病毒液,尽量减少冻融次数。
• 检测病毒滴度:定期检测病毒滴度,确保病毒质量。
4. 其他方法
• 加入Polybrene:实在不行可考虑加入Polybrene(助感染试剂)增强感染效果,但Polybrene具有细胞毒性,使用时需谨慎。一般建议Polybrene的终浓度为510μg/ml,但需根据细胞类型和实验需求进行优化。
• 优化感染条件:根据细胞类型和实验需求,优化感染条件,如感染时间、温度等。
慢病毒感染细胞效率低可能是由细胞类型、细胞生长状态、病毒质量等多种因素导致的。通过加大病毒量、采用浓缩病毒、保证细胞良好生长状态、调整细胞密度、避免反复冻融、检测病毒滴度、加入Polybrene等方法,可以提高慢病毒感染细胞的效率。