慢病毒滴度的测定方法主要有4种,即Elisa法检测病毒颗粒中p24蛋白,PCR法检测病毒颗粒RNA和检测整合到基因组的病毒DNA,以及通过FACS对荧光蛋白的表达水平。
我们采用的是定量PCR检测整合到细胞(293T)基因组中病毒DNA的方法,此方法的检测结果相对最为准确。因为ELISA和检测病毒RNA的方法检测的只是病毒颗粒的量,包括无活性的病毒颗粒,这会使得滴度检测结果偏高,而我们实验是需要有活性的慢病毒才能发挥转染作用;FACS法所检测的荧光蛋白则受到启动子及荧光蛋白在目的细胞表达水平的影响,会使得检测结果偏低。