产品信息

产品用途：iPSC-Microglia主要用于神经退行性疾病的基础研究、药物筛选、细胞治疗研究等领域。例如，可用于研究帕金森（PD）、阿尔兹海默症（AD）的发病机制，筛选治疗这些疾病的潜在药物，以及探索细胞治疗在神经退行性疾病治疗中的应用）。目前已成为脑疾病体外研究的主流工具之一。

注意：本产品在生产过程中严格控制无菌，后续培养过程请根据实际情况是否添加抗生素。

产品制备流程和细胞鉴定

产品制备流程和明场图

图1. 小胶质制备

• iPSC细胞培养：iPSC细胞使用专用培养基进行培养，置于37℃、5% CO₂的恒温培养箱中，定期更换培养基，保持细胞处于良好的生长状态。
• HPC诱导分化：当iPSC细胞生长至一定密度时，重新进行接种，更换为HPC诱导培养基，进行HPC分化。在诱导过程中，通过调整培养基成分和培养条件，引导 iPS 细胞向HPC方向分化。
• Microglia细胞分化：收获的HPC重新进行接种，更换Microglia诱导培养基，进行Microglia分化。在诱导过程中，通过调整培养基成分和培养条件，引导 HPC 细胞向Microglia方向分化
• 细胞冻存：收集分化完成的Microglia，调整细胞浓度，加入冻存液，分装到冻存管中，按照程序降温法进行冻存。

免疫荧光检测小胶质细胞特异性标志物（IBA1、P2Y12）

图2. 免疫荧光检测小胶质细胞特异性标志物

免疫荧光染色显示iPSC分化的小胶质细胞成熟培养4天后表达小胶质特异性标志物P2Y12（红色）和IBA1（绿色），细胞核由DAPI复染（蓝色）。合并图显示P2Y12与IBA1共定位，确认小胶质身份。

流式检测结果

图3. 流式细胞术检测小胶质细胞相关标志物表达

通过流式细胞术检测iPSC分化的小胶质细胞中关键标志物的表达情况。结果显示，CD45高表达，CD45是一种蛋白酪氨酸磷酸酶受体，表达于小胶质细胞。CD11b高表达，CD11b是整合素蛋白，是髓系细胞的通用标志，用于圈定小胶质细胞群体。TREM2高表达，TREM2是一种跨膜受体，在正常大脑中仅由小胶质细胞表达。TMEM119高表达，TMEM119是目前公认的最具小胶质细胞特异性的标志物；P2Y12高表达，P2Y12是嘌呤能受体，参与小胶质细胞对细胞外ATP的趋化反应，是稳态小胶质细胞的关键标志。

清除能力检测结果

图4. 流式细胞术检测小胶质细胞对乳胶微球的摄取能力

iPSC分化的小胶质细胞能够通过内吞作用高效摄取乳胶微球，几乎全部细胞（98.44%）均摄取阳性，证实了iPSC分化的小胶质细胞具有强大的吞噬功能。

炎症反应

图5. Elisa检测小胶质细胞炎症因子释放能力

iPSC分化的小胶质细胞在LPS（100 ng/ml）刺激24小时后，通过ELISA法检测上清因子，结果显示LPS刺激后小胶质细胞分泌趋化因子，产生炎症反应。

质量控制

• 通过细菌、真菌、支原体检测。
• 通过免疫荧光鉴定。

处理原则

• 本产品仅供科研使用，不得用于临床治疗、诊断或其他非科研用途。
• 在操作本产品前，操作人员应具备相应的细胞培养技能和生物安全防护知识，严格遵守生物安全操作规程，穿戴好无菌手套、口罩、防护服等防护用品，在超净工作台中进行无菌操作，避免细胞受到污染。
• 冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出后，应迅速解冻，避免细胞在解冻过程中受到损伤；解冻后的细胞应尽快进行复苏和培养，不宜长时间放置。
• 细胞培养过程中，应严格控制培养条件（如温度、CO₂浓度、pH值等），保持培养环境的稳定；培养基应在有效期内使用，使用前应检查培养基是否有浑浊、变色、沉淀等异常现象，若有异常，不得使用。
• 在进行细胞传代、冻存等操作时，应避免过度消化或用力吹打细胞，以免损伤细胞；传代比例应根据细胞的生长速度和特性进行适当调整。
• 本产品应按照规定的储存条件进行储存和运输，在储存和运输过程中，应定期检查储存设备和运输箱的温度，确保温度符合要求；若发现储存设备或运输箱出现故障，应及时采取措施，避免影响细胞质量。
• 每批产品的质量控制报告应妥善保存，以备查阅；若在使用过程中发现产品质量问题，应及时与生产厂家联系，以便及时处理。