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为什么LV包装出毒量很低?

1) 细胞状态:LV的包装一般使用293T细胞,293T细胞的活力、生长状态,是否处于对数生长期、铺板是否均匀等对病毒的产量影响很大。

2) 目的基因:目的基因的大小、序列及翻译的蛋白是否含有毒性均会影响包装效果;若目的片段较大(>2.5k),则可能会导致包装滴度下降,甚至无法包装。某些过表达会产生细胞毒性的蛋白,可能会导致细胞异常从而出毒量低(可考虑更换为腺病毒)。

3) 质粒质量:做好空载质粒的阴性对照(GFP组),确保包装目的基因的质粒载体构建完整。

4) 收毒时机:转染后24、48h观察细胞生长状态及荧光状态,生长状态良好一般于48h第一次收集病毒上清,换液后于72h再次收集病毒上清。

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