Journal for ImmunoTherapy of Cancer
靶向突变型钙网蛋白的CAR-T细胞疗法在骨髓增殖性肿瘤中的应用研究
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该研究首次证实突变型CALR可作为骨髓增殖性肿瘤的特异性靶点，开发出高效且选择性的CAR-T细胞疗法，并揭示了抗凋亡机制及联合用药策略，为MPN治疗提供了全新方向。
文献概述
本文《Mutant calreticulin enables potent and selective CAR-T cell therapy in preclinical models of myeloproliferative neoplasms》，发表于《Journal for ImmunoTherapy of Cancer》杂志，回顾并总结了突变型钙网蛋白（mCALR）作为骨髓增殖性肿瘤（MPNs）特异性新抗原在CAR-T细胞治疗中的应用潜力。研究设计并筛选了五种不同的CAR结构，最终确定一种具有强效且特异性杀伤活性的CAR-T细胞构建体（CART3-mCALR），在细胞系、患者来源细胞及异种移植模型中验证其抗肿瘤活性，并通过转录组学分析揭示了治疗抵抗机制，提出了联合BH3类似物如venetoclax的解决方案。整段通顺、有逻辑，结尾用中文句号，段落结尾使用背景知识
骨髓增殖性肿瘤（MPNs）是一类由造血干细胞克隆性扩增引起的血液系统恶性肿瘤，主要包括原发性血小板增多症（ET）和原发性骨髓纤维化（MF），其特征为髓系细胞过度生成。约85%的MPN患者携带JAK2、MPL或CALR基因突变，其中CALR突变是ET和MF的主要驱动因素之一。该突变导致CALR基因第9外显子发生插入或缺失，引起移码突变，生成一个独特的C端新抗原（mCALR），仅表达于肿瘤细胞，而不在正常组织中出现，因此是极具吸引力的免疫治疗靶点。尽管CAR-T细胞疗法在B细胞恶性肿瘤中取得显著成功，但在髓系肿瘤中的应用受限于缺乏真正肿瘤特异性靶点及潜在的“脱靶”毒性。此外，MPN患者常伴有T细胞功能障碍，影响免疫治疗响应。当前治疗手段如JAK抑制剂仅能缓解症状，无法根治疾病。异基因造血干细胞移植虽具治愈潜力，但毒性高，适用人群有限。因此，开发靶向mCALR的CAR-T疗法，有望实现对恶性克隆的精准清除，同时保留正常造血功能。该研究正是基于这一未满足的临床需求，探索mCALR作为CAR-T靶点的可行性，填补了领域空白。
研究方法与实验
研究团队基于已知的抗mCALR单克隆抗体序列设计了五种不同的第二代CAR结构，均包含scFv、CD8跨膜区、4-1BB和CD3ζ信号域，并通过慢病毒载体在T细胞中表达。首先在HEK293T细胞和原代T细胞中验证CAR表达效率。随后在多种髓系肿瘤细胞系（K562、HEL、THP-1）及其稳定过表达mCALR的同基因细胞系中进行体外杀伤实验，评估各CAR构建体的特异性和细胞毒性。选择最优CAR（CART3-mCALR）后，进一步在患者来源的MPN细胞及异种移植小鼠模型中评估其抗肿瘤活性，监测肿瘤负荷、CAR-T细胞扩增与组织浸润情况。通过bulk RNA-seq分析MPN患者HSPCs的转录组，结合单细胞RNA-seq分析治疗后残留肿瘤细胞，探索耐药机制。最后，利用venetoclax等BH3类似物进行联合治疗实验，验证其对CAR-T细胞功能的增强作用。关键结论与观点
研究意义与展望
本研究首次在临床前模型中验证了靶向mCALR的CAR-T细胞疗法在MPNs中的可行性和高效性，为这一难治性血液肿瘤提供了全新的治疗策略。由于mCALR仅在肿瘤细胞中表达，该疗法有望实现精准靶向，减少对正常组织的损伤，提高安全性。研究不仅证明了单一CAR-T治疗的有效性，还深入揭示了肿瘤内在的凋亡抵抗机制，拓展了对免疫治疗耐药的理解。
更重要的是，研究提出了CAR-T联合BH3类似物的组合方案，为克服耐药、提高长期缓解率提供了理论依据。未来研究可进一步优化CAR结构、探索通用型CAR-T或体内CAR-T策略，推动该疗法进入临床试验。此外，该策略可能适用于其他表达mCALR的血液系统疾病，具有广泛的应用前景。该工作为MPN的精准免疫治疗奠定了坚实基础。
结语
本研究系统性地开发并验证了一种靶向突变型钙网蛋白（mCALR）的CAR-T细胞疗法，展示了其在骨髓增殖性肿瘤（MPNs）中的强效且特异的抗肿瘤活性。研究通过构建多种CAR结构，筛选出最具功能活性的CART3-mCALR，能够在体外和体内有效清除mCALR阳性肿瘤细胞，包括患者来源的原代细胞，并显著延长荷瘤小鼠的生存期。CAR-T细胞在体内持续扩增并浸润至骨髓和脾脏，发挥长期抗肿瘤作用。转录组分析揭示了肿瘤细胞通过上调抗凋亡蛋白（如Bcl-2）介导对CAR-T杀伤的抵抗，而联合使用BH3类似物venetoclax可有效逆转这一耐药表型。这些发现不仅确立了mCALR作为MPN免疫治疗的理想靶点，也为克服CAR-T治疗耐药提供了切实可行的联合策略，具有重要的转化医学价值和广阔的临床应用前景。
