Molecular Cancer
AFAP1-AS1通过调控AXIN2可变剪接促进肺腺癌耐药
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该研究揭示了长链非编码RNA AFAP1-AS1在肺腺癌耐药中的关键作用，发现其通过与剪接因子SRSF1和SRSF3相互作用，促进AXIN2第7外显子跳跃剪接，生成短亚型AXIN2-S，进而激活Wnt/β-catenin通路，诱导耐药性增强。研究机制新颖，具有潜在临床转化价值。
文献概述
本文《Long non-coding RNA AFAP1-AS1 promotes alternative splicing of AXIN2 by facilitating SRSFs phase separation to induce drug resistance in lung adenocarc2inoma》，发表于Molecular Cancer杂志，回顾并总结了AFAP1-AS1在肺腺癌耐药中的分子机制。研究团队通过RNA pull-down、质谱分析、RIP、FISH等多种实验手段，筛选并验证AFAP1-AS1与SRSF1及SRSF3的直接结合，并促进其液-液相分离，从而调控AXIN2前体mRNA的可变剪接，生成短亚型AXIN2-S。该亚型可抑制β-catenin的降解，增强其核内积累，持续激活Wnt/β-catenin通路，最终导致肺腺癌细胞对化疗及靶向治疗产生耐药性。
背景知识
肺腺癌（LUAD）是非小细胞肺癌中最常见的亚型，且耐药性问题是治疗失败的主要原因。长链非编码RNA（lncRNA）已被广泛研究在癌症中的调控作用，但其在RNA剪接调控中的机制仍不完全清楚。AFAP1-AS1在多种癌症中高表达，具有促癌作用，但其在肺腺癌中的剪接调控功能此前未被报道。SRSF1和SRSF3是RNA剪接的重要顺式调控因子，具有内在无序区，易发生液-液相分离（LLPS），形成剪接体凝聚体。本研究首次发现AFAP1-AS1通过结合并增强SRSF1/3的LLPS，调控AXIN2的剪接模式，从而影响Wnt通路活性。AXIN2是Wnt通路的关键负调控因子，其剪接异构体AXIN2-L和AXIN2-S在功能上存在拮抗作用。该机制不仅解释了肺腺癌耐药的新通路，也为lncRNA在剪接调控中的功能拓展提供了新思路。
研究方法与实验
本研究采用肺腺癌细胞A549和PC9作为模型，通过AFAP1-AS1过表达与敲低实验，结合RNA-seq与rMATS分析，鉴定其调控的剪接事件。利用RT-PCR、Western blot、RIP、FISH、FRAP等多种分子生物学手段验证AFAP1-AS1与SRSF1/3的结合及其对AXIN2剪接的影响。进一步构建AXIN2-L和AXIN2-S表达载体，评估其对β-catenin表达、磷酸化、泛素化及核定位的影响。在细胞与动物模型中检测耐药性变化，结合临床组织样本分析AFAP1-AS1与β-catenin表达相关性。
关键结论与观点
研究意义与展望
该研究首次揭示了AFAP1-AS1在RNA剪接调控中的功能，并建立其与肺腺癌耐药性的机制联系。研究结果提示AFAP1-AS1、SRSF1/3以及AXIN2剪接异构体可作为肺腺癌耐药的潜在生物标志物或治疗靶点。未来可开发针对AFAP1-AS1的ASO治疗策略，或筛选小分子抑制剂阻断其与剪接因子的结合，以恢复化疗敏感性。此外，该机制是否在其他癌症中也普遍存在，仍需进一步研究。
结语
本研究系统性地揭示了AFAP1-AS1在肺腺癌耐药中的作用机制。通过促进SRSF1和SRSF3的液-液相分离，AFAP1-AS1诱导AXIN2的异常剪接，生成短亚型AXIN2-S，从而抑制β-catenin的降解，导致其核内积累，激活Wnt/β-catenin信号通路。这一过程最终赋予肺腺癌细胞更强的耐药性。研究不仅拓展了对lncRNA在RNA剪接调控中功能的认识，也为肺腺癌耐药的治疗策略提供了新的分子靶点。未来研究可聚焦于开发AFAP1-AS1沉默或剪接因子相分离抑制剂，以逆转耐药表型，提高治疗效果。此外，结合临床样本的分析结果，AFAP1-AS1表达水平可作为肺腺癌患者化疗或靶向治疗反应的预测指标，具有重要的转化医学价值。
