Journal for Immunotherapy of Cancer | 增强多发性骨髓瘤抗肿瘤免疫的新策略
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本研究发现ROS-ERS与焦亡诱导剂联合治疗可显著增强多发性骨髓瘤（MM）的免疫原性，促进树突状细胞成熟和T细胞激活，为开发更有效的MM免疫治疗策略提供了新思路。
多发性骨髓瘤（MM）是一种浆细胞恶性肿瘤，其特征是浆细胞异常增殖并分泌大量单克隆免疫球蛋白（M蛋白），导致器官损伤。尽管当前治疗方法如蛋白酶体抑制剂、抗CD38抗体和CAR-T细胞治疗已显著改善患者预后，但大多数患者仍会复发或产生耐药性，提示需要开发新的免疫刺激策略。免疫原性细胞死亡（ICD）和焦亡（pyroptosis）是两种程序性细胞死亡形式，可释放损伤相关分子模式（DAMPs）并激活适应性免疫应答，但单独诱导ICD或焦亡在克服MM免疫抑制微环境中作用有限。因此，联合诱导ICD和焦亡可能通过协同机制增强抗肿瘤免疫应答。本文研究了ROS-ERS诱导剂REI与焦亡诱导剂QS-21单独或联合处理对MM细胞的影响，评估其在体内外对树突状细胞和T细胞的激活能力，以及对肿瘤生长的抑制作用。研究旨在揭示ROS-ERS和焦亡在增强MM免疫原性中的分子机制，并探索其在免疫治疗中的潜在应用。
在本研究中，研究人员使用MM细胞系RPMI-8226和U266，分别及联合处理REI和QS-21，通过CCK8细胞活力检测评估药物的细胞毒性。结果显示，两种药物均呈浓度和时间依赖性抑制MM细胞增殖，而联合处理（R+Q）表现出更强的细胞毒性。进一步通过荧光素酶活性检测发现，R+Q显著降低Luc-RPMI-8226细胞活力，同时流式细胞术分析显示，联合处理显著提高细胞凋亡率，显微镜观察也显示形态学变化和细胞数量减少。这表明R+Q处理具有协同杀伤MM细胞的能力。 为了评估ICD标志物的释放，研究人员检测了细胞膜表面CALR表达、细胞外ATP、HSP70和HMGB1的分泌情况。联合处理显著增强这些DAMPs的释放，特别是CALR的表面暴露和ATP、HSP70、HMGB1的分泌，说明该处理可有效激活ICD通路。此外，通过JC-1线粒体膜电位检测发现，R+Q处理显著降低线粒体膜电位，表明线粒体功能受损。透射电镜进一步证实线粒体结构破坏，包括膜破裂和嵴消失。同时，LC3-II/LC3-I比值升高，提示自噬激活，但p62蛋白未有效降解，说明自噬体-溶酶体融合受阻，导致线粒体积累，从而进一步增加ROS生成。 在焦亡相关检测中，R+Q处理显著上调NLRP3、caspase-1和GSDMD-N的表达，并促进IL-1β和IL-18的分泌。显微镜和TEM观察发现，R+Q组细胞膜孔更大，提示焦亡程度更强。这表明联合处理不仅增强ICD，还通过激活NLRP3通路促进焦亡，从而提高DAMP释放和炎症因子分泌，进一步激活免疫细胞。 体外实验中，研究人员使用MM患者来源的骨髓单个核细胞（BM-MNCs）和U266细胞构建共培养系统，模拟体内免疫激活。联合处理显著增强树突状细胞（DC）表面共刺激分子CD80、CD86、CD70和MHC-II的表达，表明DC成熟度提高。同时，T细胞表面CD3+CD27+CD28+和CD3+CD8+CD27+CD28+比例上升，而CD57+衰老T细胞减少，说明R+Q可逆转T细胞衰老并促进其激活。进一步评估细胞毒性发现，R+Q处理组的T细胞对U266杀伤能力显著提高，且细胞凋亡率增加，验证了其在体外增强抗肿瘤免疫应答的作用。 在体内实验中，研究人员使用NOG小鼠模型，皮下注射U266细胞并静脉输注MM患者来源的单核细胞，构建人源化小鼠模型。小鼠分为四组：PBS、REI、QS-21和R+Q。R+Q组肿瘤体积显著降低，PET-CT显示标准化摄取值（SUV）最低，肿瘤重量也最小，表明联合处理有效抑制MM生长。流式细胞术分析发现，R+Q组DC成熟度和T细胞激活标志物表达显著上升，同时衰老T细胞减少，IFN-γ和TNF-α分泌增加，说明体内免疫应答增强。此外，小鼠健康状态良好，无明显毒性反应，验证该组合策略的安全性。 综上所述，该研究系统性评估了ROS-ERS与焦亡诱导剂联合处理在MM中的作用。通过体外和体内实验，研究人员发现联合处理不仅增强DAMPs释放，还促进线粒体损伤、自噬异常和焦亡激活，从而提高树突状细胞和T细胞的免疫激活能力。这些结果为开发基于ICD和焦亡的新型MM免疫治疗策略提供了理论依据，并提示该组合可作为潜在的抗MM免疫调节方案。
本研究证实，ROS-ERS与焦亡诱导剂联合处理可显著增强MM细胞的免疫原性，通过诱导线粒体损伤、ERS和自噬异常，激活NLRP3/GSDMD通路，促进焦亡和DAMP释放。体外实验显示该处理可有效激活树突状细胞和T细胞，提高抗肿瘤免疫活性，而在体内实验中，联合处理显著抑制肿瘤生长，降低SUV值，提高免疫细胞浸润并减少衰老T细胞比例。这些结果表明，该组合可有效逆转MM免疫抑制微环境，增强T细胞特异性抗肿瘤免疫应答，为开发新型MM免疫治疗策略提供重要依据。
