【方法一】

使用 TaKaRa MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction kit (Ver.5.0_Code No. 9765) 来提取鼠基因组DNA（适用于扩增≥1kb的条带）。

准备工作：

1. 备好无水乙醇。
2. Buffer WB使用前需要加入65mL的无水乙醇（试剂盒推荐56 mL，我们经过长期数据显示，加入65 mL提取的基因组纯度更高）。
3. Buffer GL若出现沉淀，请于56℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

洗脱膜上的DNA时，用0.25× TE Buffer洗脱的DNA保存时间更持久；使用前放置56℃预热，DNA洗脱效率更高。

实验流程：

1. 每个装有样品的EP管中加180μL Buffer GL, 20 μL蛋白酶K（浓度20 mg/mL），10 μL RNA酶（浓度10 mg/mL）。（注意：鼠尾不能太长，一般2~3 mm；如果鼠尾过粗，可以增大裂解体系至300 μL）。
2. 放置56℃烘箱过夜反应（一般12~16个小时）。
3. 第二天早上从烘箱取出样品放置离心机里，12000rpm离心2分钟，将毛发杂质离到管底。
4. 吸取上清至另一干净的EP管中（注意尽量不要吸到管底的毛发和杂质），再加入200μL Buffer GB和200 μL的无水乙醇，盖好盖子后充分吸打混匀。
5. 混匀后将液体转移至准备好的吸附柱中，12000rpm离心2分钟；弃滤液。
6. 向吸附柱中加入500μL Buffer WA，12000 rpm离心1分钟；弃滤液。
7. 沿吸附柱的管壁四周加入700μL Buffer WB，静置1分钟，12000 rpm离心1分钟，弃滤液。（注意：一定要保证WB中已经加过了指定体积的无水乙醇；沿着吸附柱管壁四周加入WB，有助于完全冲洗沾附管壁上的盐分。）
8. 重复操作步骤7，弃滤液。
9. 空甩：12000rpm离心2分钟。
10. 将吸附柱放置在一个新的5mL的离心管上，盖子开着，室温放置10分钟，以去除残留的乙醇（注意：乙醇残留会抑制聚合酶扩增）。
11. 向吸附柱膜的中央加入50μL预热过的0.25× TE Buffer，盖好盖子后室温静置10分钟（注意：预热的TE Buffer可以提高洗脱效率）。
12. 12000rpm离心2分钟洗脱DNA；可以将离下的液体再次加入膜中央，静置5分钟，再12000 rpm离心2分钟，获得浓度更高的DNA。
13. 提取得到的DNA可以通过电泳或紫外分光光度计进行定量。

方法二：

使用Triton X-100粗裂的方法获得鼠基因组DNA（适用于扩增＜1 kb的条带）。

Triton裂解液的配制（1 L量）：

1. 分别用电子天平称取下列物品至烧杯：

KCl：3.7 g

Tris：1.2 g

2. 加入300~400mL灭菌水溶解。
3. 加入1mL TritonX-100，充分溶解，若不能充分溶解可以放入56℃烘箱中溶解。（TritonX-100呈油状液体，注意吸取前先润洗移液器，打尽TritonX-100后才能把枪头伸到溶液中反复吹吸，否则很容易使得TritonX-100大量残留在枪头内壁上）。
4. 加入80μL浓盐酸调pH至9.0。
5. 然后用灭菌水定容至1L后，室温保存，待用。

注意：TritonX-100高压灭菌后会产生大量沉淀，请勿高压灭菌。

实验流程：

• 样品离心于管底。

1. 96孔板样品，将样品板放入迷你微孔板离心机中2500rpm离心90 s。
2. EP管样品，将样品放入离心机中12000rpm离心90 s。

• 配制裂解液。按照98 :2（Triton X-100裂解液：20 mg/mL蛋白酶K）的比例进行配制。
• 加裂解液。将配制好的裂解液混匀10次，倒入新开封的分液槽中：

1. 胚胎样品，每孔加入100 µL。
2. 鼠爪、鼠尾样品，每孔加入110 µL（注意鼠尾样品根据组织大小可适量增加裂解液）。

• 过夜裂解。将加完裂解液的样品管盖紧放入56℃烘箱过夜运行（>8 h）；
• 样品的灭活。第二天从烘箱中取出样品，使用金属浴或者PCR仪，98℃反应30分钟（注盖紧，防止样品蒸干），使蛋白酶K失活。
• 样品的离心。待灭活时间结束后，将样品离心90 s，上清即可作为PCR模板。