首页
模型资源
临床前CRO
赛业动态
客户支持
关于我们
AAV腺相关病毒免费试用
肿瘤移植模型低至399元
智鼠商城
KO/CKO小鼠模型
HUGO-GT
®
全基因组人源化模型
HUGO-Ab
®
全人源化抗体模型
免疫系统人源化模型
靶点人源化模型
免疫缺陷模型
自发肿瘤模型
眼科模型
神经模型
代谢模型
自免模型
新冠模型
工具模型
其他模型
动物模型定制服务
基因敲除小鼠
基因敲入小鼠
转基因小鼠
基因编辑大鼠
动物模型配套服务
自然繁育
快速繁育
冻存与复苏
表型分析
实验动物进口
动物健康
健康报告
动物福利
细胞模型服务
iPS细胞技术服务
基因敲除细胞系
全基因组敲除细胞库
基因敲入细胞系
过表达干扰细胞系
肿瘤细胞系
病毒包装
现货AAV腺相关病毒
体外检测
肿瘤移植模型低至399元
AI辅助的药物发现
AI辅助AAV发现
AI辅助抗体发现
创新药物研发服务
基因治疗研发平台
小核酸药物研发平台
抗体药物研发平台
细胞免疫治疗药物平台
常见疾病药效评价服务
肿瘤药效评价
眼科药效评价
神经药效评价
代谢疾病药效评价
心脑血管疾病药效评价
自免及炎症药效评价
肠道菌群药效评价
技术服务
行为学分析
分子检测
流式检测
病理分析
生理生化分析
细胞技术服务
市场活动
赛业新闻
讲座会议
视频课堂
文章干货
资料下载
生信分析工具
合作伙伴项目文章
科研奖励计划
常见问题
公司概况
加入我们
联系我们
商城
登录
CN
首页
创新药物研发服务
细胞免疫治疗药物平台
CAR分子设计和慢病毒制备
CAR分子设计和慢病毒制备
CAR分子设计
CAR分子全称为嵌合抗原受体,其结构包括信号肽分子,抗体来源的单链可变区、铰链区、跨膜区,共刺激分子结构域,CD3ζ信号转导域。
scFv筛选
scFv亲和力和特异性对CAR分子功能有重要影响,筛选合适的scFv十分重要。
连接基团(Linker)的优化
设计不同长度的Linker,使VH和VL之间的灵活度增加,进而影响结合亲和力。
铰链区(Hinge)的优化
设计不同长度的Hinge,增加抗原结合域的空间灵活度。
共刺激结构域的选择
可选择不同的共刺激分子(如4-1BB或CD28等)。
报告基因
可连接绿色荧光蛋白基因,表征CAR分子是否转导成功。
图1. CAR分子结构示意图
CAR分子设计中常用原件
分类
来源
功能
表达部位
信号肽分子
CD8α、GM-CSF等
引导CAR分子上膜
胞外
抗体scFv
专利、文献、抗体开发
靶向识别肿瘤抗原
胞外
铰链区
CD8α、IgG1、IgG4、IgGD等
维持scFv同细胞膜间的相对空间构象
胞外
跨膜区
CD8α、CD28、CD4等
锚定CAR分子膜表达
跨膜
共刺激分子
4-1BB、CD28、CD27、ICOS等
提供T细胞活化第二信号
胞内
信号转导分子
CD3ζ
提供T细胞活化第一信号
胞内
载体构建
在设计好CAR分子后,通常需要对其进行基因合成并亚克隆至慢病毒穿梭质粒上,构建后的其结构通常如图所示。此外,赛业还可以提供多种现货型的CAR慢病毒质粒载体库,靶点包括人的CD19、BCMA、GPC3、FAP和HER2等,且该载体库还在不断的丰富和更新中。
图2. CAR慢病毒载体结构图示
病毒包装和纯化
赛业在慢病毒制备方面具有多年的经验,可以提供多样化的慢病毒制备服务。赛业使用安全性高的第三代慢病毒包装系统,其制备流程如图所示。
图3. 慢病毒包装技术路线
CAR分子设计和慢病毒制备服务项目
CAR分子设计及载体构建
CAR慢病毒制备
靶抗原稳转细胞株构建
交付物:
载体构建报告、慢病毒质检报告、慢病毒浓缩液
客户需要提供信息:
靶点抗原信息、抗体scFv序列(可选)、CAR分子结构信息、所需载体信息
CAR分子设计和慢病毒制备服务优势
丰富的CAR慢病毒质粒载体库,可提供快速优质的服务
抗原高表达、高稳定性的稳转细胞株构建服务
高滴度高纯度的慢病毒制备
严格的质控标准
CAR分子设计和慢病毒制备服务案例
CD19抗原慢病毒滴度检测
将表达CD19抗原的慢病毒纯化液进行梯度稀释(0.01、0.1、1、10μL四个梯度),分别加入到相同数量的293T细胞中,72小时后流式检测293T细胞阳性率(即被慢病毒感染的293T细胞占细胞总数的百分比),进而计算慢病毒的转导滴度。
如图所示,CD19抗原阳性细胞的数量随转染病毒梯度的增加而逐渐升高,表明该慢病毒有良好的感染活性,并计算病毒滴度为:1.4×10^8 TU/mL。
图4. CD19抗原慢病毒滴度检测结果
CD19-293T稳转细胞株构建
使用上述CD19抗原慢病毒转染293T细胞,经过多轮筛选,得到CD19抗原高度均一表达的CD19-293T稳转细胞。
图5. CD19-293T细胞CD19抗原阳性率检测结果
FMC63 CAR慢病毒滴度检测
我们设计了如下结构的靶向CD19抗原的FMC63 CAR分子,并将其构建慢病毒载体上,进行慢病毒制备。采用上述方法检测FMC63 CAR慢病毒滴度,病毒滴度约为:4.33×10^8 TU/mL。
图6. FMC63 CAR分子结构
图7. FMC63 CAR慢病毒滴度检测结果
马上咨询CAR分子设计和慢病毒制备服务,为您的实验助力
欢迎填写以下信息订阅赛业生物邮件,获取最新资讯
*
姓名:
*
单位:
*
电话:
*
邮箱:
*
感兴趣的研究领域:
同意我们的
隐私政策
提交
联系我们
在线咨询
微信咨询
交流社区
电话咨询