NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293报告基因细胞系

产品信息

服务编号	SY-KI-00007
宿主细胞	HEK293（人胚胎肾细胞）
稳定表达基因	VEGFR2（KDR，FLK1; ref seq. NM_002253.4）、NFAT-Luciferase
培养体系	DMEM+10%FBS（0.5ug/ml puromycin，500ug/ml hygromycin）
培养条件	95% 空气；5% CO2；37℃
规格	1×10⁶个细胞/管
储存条件	液氮（-196℃）
运输条件	干冰运输
应用领域	VEGF/VEGFR信号通路研究、药物高通量筛选（HTS）、激动剂/拮抗剂效价评估（EC50/IC50）、VEGF蛋白的质量控制。
检测方法	流式细胞术、荧光素酶检测（化学发光法）

注意：本产品在生产过程中严格控制无菌。在后续培养过程中，请根据实际情况决定是否在培养基中添加抗生素。

背景介绍

血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）信号通路在血管生成（Angiogenesis）和淋巴管生成（Lymphangiogenesis）过程中发挥着核心调控作用。该通路通过促进内皮细胞的增殖、迁移和存活，来影响胚胎发育、组织修复和再生等生理过程。然而，该通路的异常激活也与多种疾病密切相关，尤其是肿瘤的生长、侵袭和转移，以及年龄相关性黄斑变性（AMD）、糖尿病视网膜病变、类风湿性关节炎等病理性血管生成疾病。因此，靶向VEGF/VEGFR通路已成为治疗这些疾病的重要策略。

NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293报告基因细胞株是一种经过工程化改造的、用于特异性检测VEGF/VEGFR信号通路活性及下游NFAT转录因子激活状态的高灵敏度细胞模型。

当细胞受到VEGF（血管内皮生长因子）刺激时，会激活VEGFR及其下游的钙调磷酸酶（Calcineurin）信号通路，导致NFAT去磷酸化并进入细胞核，启动荧光素酶的表达。荧光的强度与VEGF/VEGFR通路的激活程度成正比，因此该细胞株是筛选VEGF/VEGFR2 信号通路的激动剂或拮抗剂的理想工具，为高通量筛选（HTS）该通路的靶向药物和进行机制研究提供了高效、可靠的平台。

该细胞系已通过流式细胞术评估了VEGFR2的表达，并使用重组人VEGF165蛋白和抗VEGF中和抗体进行了功能验证。

图1. NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293 报告基因细胞株原理图

应用领域

高通量药物筛选（HTS）：快速筛选靶向VEGF/VEGFR信号通路的激动剂或拮抗剂（如小分子化合物、抗体、多肽等）。
药物效价评估：为癌症抗血管生成治疗提供工具，用于评估候选药物的EC50（半最大效应浓度，针对激动剂）或IC50（半抑制浓度，针对拮抗剂）的体外活性。
信号通路机理研究：研究VEGFR下游信号转导事件，以及与其他通路的交叉对话（Crosstalk）。
质量控制：用于VEGF蛋白产品或相关生物制品的活性检测。

VEGFR2表达验证

图2. 流式细胞术检测NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293细胞表面 VEGFR2 的表达。将NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293细胞（红色）或对照HEK293细胞（蓝色）用PE抗人CD309（VEGFR2）抗体（BioLegend #392203）染色，并通过流式细胞术进行分析。

功能验证

NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293对人VEGF的剂量反应（EC50测定）

验证NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293报告基因细胞株对其人源配体VEGF165的动态响应性能，并通过剂量效应曲线计算其半数最大效应浓度（EC50），以评估该细胞株的灵敏度与功能性。

图3. NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293报告基因细胞株对其人源配体VEGF165的剂量反应曲线。用浓度递增的VEGF165处理细胞6小时，使用荧光素酶检测试剂盒测定发光值。

抗VEGF抗体阻断NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293中VEGF165与VEGFR2的结合（IC50测定）

验证VEGF抗体对NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293报告基因细胞株的阻断效应，并通过剂量抑制曲线计算其半数最大抑制浓度（IC50），以评估该细胞株的灵敏度与功能性。

图4. VEGF抗体对NFAT-Luc/VEGFR2 HEK293报告基因细胞株的剂量反应曲线。用浓度递增的VEGF抗体与VEGF165预孵育1小时，随后将混合液加入细胞中孵育6小时，使用荧光素酶检测试剂盒测定发光值。

注意事项

为保证实验结果的重现性，请保持细胞处于对数生长期，传代次数不宜过多（建议低于20代）。
铺板时的细胞密度对信号强度影响显著，需通过预实验优化。
刺激时间（5-6小时）为建议值，可根据具体实验情况在4-8小时内优化。
使用DMSO溶解化合物时，最终浓度建议不超过0.1%，以避免细胞毒性。
本说明书仅供参考，具体实验条件请根据您的实验体系进行优化。

质量控制

通过细菌、真菌、支原体检测。
通过细胞复苏活率检测，复苏存活率>90%。

处理原则

严格的无菌环境：务必保证实验室整体、超净台和培养箱的清洁。
规范的操作方式：请按照产品说明书描述的方式操作，严格控制变量，做好对照实验。
合适的、质量可靠的实验耗材和试剂：使用的试剂必须经验证可靠，适宜细胞生长且批间差异小。

注意：本产品冻存液中含有DMSO，其具有潜在风险，请谨慎处理。