F9 KO小鼠

血友病（Hemophilia）是一组遗传性凝血功能障碍的出血性疾病，其共同的特征是活性凝血活酶生成障碍，凝血时间延长，患者有轻微创伤后的出血风险，重症患者甚至在无明显外伤时也可发生“自发性”出血。作为一种X连锁先天性罕见病，血友病B多发于男性人群，全球约每3万名新生男婴中就有1人患病 ^[1]。血友病B是因F9(FIX)基因突变而缺乏第9凝血因子（Factor IX）所致，其严重程度通常与血浆中IX因子的活性水平相关。轻度血友病患者（IX因子活性>5%，>0.05 IU/mL）不会出现自发性出血，但创伤或术后的出血量有所增加；中度血友病患者（IX因子活性为1%-5%，0.01-0.05 IU/mL）很少发生自发性出血，但即使是轻微外伤也会引起长时间出血；重度血友病患者（IX因子活性<1%，<0.01 IU/mL）会出现自发性出血、软组织或关节出血以及严重的皮下血肿 ^[2]。据美国疾病预防控制中心（CDC）统计，重度血友病患者占所有确诊血友病B患者的30%-40% ^[3]。F9基因编码维生素K依赖性的丝氨酸蛋白酶（IX因子），该因子在内源性凝血途径中起着关键作用。IX因子作为一种无活性的酶原在血液中循环，经XIa因子切除激活肽而转化为活性形式IXa。凝血因子IX在凝血级联反应中通过与Ca2+离子、膜磷脂和Ⅷ因子的相互作用来激活因子X，当Ⅷ和IX因子水平≥正常值的50%时人体内可正常止血 ^[4]。F9基因缺失可导致IX因子不足的凝血障碍，引发伴X染色体隐性遗传的B型血友病。

F9 KO小鼠是利用基因编辑技术敲除小鼠F9基因所构建的血友病B疾病模型。F9 KO小鼠体内F9 mRNA表达缺失，并出现凝血功能障碍等血友病B相关表型，可用于人类血友病B的遗传机制和临床表型的研究，助力治疗药物的开发、筛选和评价。该模型纯合子是可存活且可育的。小鼠在断尾后会出现致命性失血，剪尾后必须采取及时的止血措施，防止敲除纯合子小鼠失血和死亡。一般在小鼠2～3周龄时打耳标（剪刀剪一个豁口用于区分）后剪尾鉴定，剪尾后及时灼烧尾部切口（可用酒精灯烧热的金属镊子），灼烧后将小鼠放入干净的笼盒内避免伤口感染并添加环境丰富物。