智鼠故事 
C57BL/6JCya-Rnf4em1flox/Cya 条件性基因敲除小鼠
复苏/繁育服务
产品名称：
Rnf4-flox
产品编号：
S-CKO-04814
品系背景：
C57BL/6JCya
* 使用本品系发表的文献需注明：Rnf4-flox mice (Strain S-CKO-04814) were purchased from Cyagen.
交付类型
周龄
性别
基因型
数量
只
基本信息
品系名称
C57BL/6JCya-Rnf4em1flox/Cya
品系编号
CKOCMP-19822-Rnf4-B6J-VA
产品编号
S-CKO-04814
基因名
Rnf4
品系背景
C57BL/6JCya
基因别称
SNURF；Gtrgeo8
NCBI号
修饰方式
条件性基因敲除
品系说明
该品系是基于策略设计时的数据库信息制作而成，建议您在购买前查询最新的数据库和相关文献，以获取最准确的表型信息。
小鼠表型
MGI:1201691 Mice homozygous for a null mutation display lethality throughout fetal growth and development with ventricular septal defects and cardiac insufficiency. MEFs from homozygous mice display global DNA hypermethylation.
质控标准
精子检测
① 冷冻前验证精子活力观察
② 冷冻验证每批次进行复苏验证
品系状态
在研小鼠
环境标准
SPF
供应地区
中国
品系详情
Rnf4位于小鼠的5号染色体，采用基因编辑技术，通过高通量电转受精卵方式，获得Rnf4基因条件性敲除小鼠，性成熟后取精子冻存。
Rnf4-flox小鼠模型由赛业生物（Cyagen）采用基因编辑技术构建。该模型针对小鼠Rnf4基因进行条件性敲除，Rnf4基因位于小鼠5号染色体上，由8个外显子组成，ATG起始密码子位于2号外显子，TGA终止密码子位于8号外显子。条件性敲除区域（cKO区域）位于3号外显子，包含127个碱基对的编码序列。删除该区域会导致小鼠Rnf4基因功能的丧失。
Rnf4-flox小鼠模型的构建过程包括利用BAC克隆RP23-216I5作为模板，通过PCR扩增产生同源臂和cKO区域，进而构建靶向载体。随后，将核糖核蛋白（RNP）和靶向载体共同注入受精卵，进行基因编辑。出生的小鼠通过PCR和测序分析进行基因型鉴定。
值得注意的是，对于纯合子突变的小鼠，它们在胎儿生长和发育过程中会出现心室间隔缺损和心脏功能不足，导致死亡。此外，纯合子小鼠的成纤维细胞（MEFs）表现出全基因组DNA高甲基化现象。3号外显子覆盖了21.82%的编码区域。第2号内含子用于5'-loxP位点的插入，长度为4095个碱基对；第3号内含子用于3'-loxP位点的插入，长度为1762个碱基对。有效的cKO区域长度约为0.6千碱基对。
由于生物过程的复杂性，现有的技术水平无法完全预测loxP插入对基因转录、RNA剪接和蛋白质翻译的影响。因此，该策略是基于现有数据库中的遗传信息设计的。Rnf4-flox小鼠模型可用于研究Rnf4基因在小鼠体内的功能，并为进一步的基因研究提供基础。
基因研究概述
RNF4（RING finger protein 4）是一种多功能E3泛素连接酶，广泛表达于各种组织中，并参与DNA修复、染色质和转录调控等多种生物学过程。RNF4通过其SUMO靶向泛素连接酶（STUbL）活性，对底物进行泛素化修饰，进而影响其稳定性和功能。此外，RNF4还可以通过调节DNA甲基化、组蛋白修饰等途径，影响基因表达和细胞命运决定。
RNF4在多种癌症中发挥重要作用。研究表明，RNF4在多种人类肿瘤类型中表达上调，与肿瘤的发生和发展密切相关。例如，在乳腺癌和结肠腺癌中，RNF4蛋白水平升高与患者预后不良相关[2]。此外，RNF4还可以通过稳定癌基因蛋白，如β-catenin、Myc、c-Jun和Notch内域（N-ICD）蛋白，促进肿瘤的发生和发展[2]。
RNF4在DNA修复中也发挥重要作用。研究表明，RNF4可以促进DNA复制，维持基因组稳定性[1]。RNF4缺失会导致DNA复制应激，并增加染色质中过度SUMO化蛋白的积累，从而影响DNA复制和修复[1]。此外，RNF4还可以通过泛素化PARP1，促进其从染色质中去除，进而影响DNA修复过程[3]。
RNF4还参与染色质重塑和转录调控。研究表明，RNF4可以拮抗DNA甲基化介导的转录抑制，通过泛素化甲基-CpG结合蛋白2（MeCP2），促进基因表达[4]。此外，RNF4还可以通过泛素化转录抑制因子PARIS，解除其对转录协同激活因子PGC-1α的抑制，进而影响基因表达和细胞代谢[5]。
RNF4在细胞应激反应中也发挥重要作用。研究表明，RNF4与TOPORS协同作用，通过STUbL活性，促进DNA蛋白交联（DPC）修复和砷诱导的PML小体降解[6]。RNF4缺失会导致SUMO化蛋白清除障碍，细胞周期停滞和细胞凋亡[6]。
RNF4还参与造血发育。研究表明，RNF4在斑马鱼造血过程中发挥重要作用，RNF4缺失会导致中性粒细胞数量减少[7]。机制研究表明，RNF4通过调节DNMT1-C/EBPα轴，影响粒细胞生成[7]。
综上所述，RNF4是一种多功能E3泛素连接酶，参与DNA修复、染色质重塑、转录调控和细胞应激反应等多种生物学过程。RNF4在多种癌症和遗传性疾病中发挥重要作用，是未来癌症治疗和基因治疗的重要靶点。
参考文献：
1. Her, Joonyoung, Zheng, Haiyan, Bunting, Samuel F. 2024. RNF4 sustains Myc-driven tumorigenesis by facilitating DNA replication. In The Journal of clinical investigation, 134, . doi:10.1172/JCI167419. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38530355/
2. Thomas, Jane J, Abed, Mona, Heuberger, Julian, Schwartz, Alan L, Orian, Amir. . RNF4-Dependent Oncogene Activation by Protein Stabilization. In Cell reports, 16, 3388-3400. doi:10.1016/j.celrep.2016.08.024. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27653698/
3. Krastev, Dragomir B, Li, Shudong, Sun, Yilun, Ramadan, Kristijan, Lord, Christopher J. 2022. The ubiquitin-dependent ATPase p97 removes cytotoxic trapped PARP1 from chromatin. In Nature cell biology, 24, 62-73. doi:10.1038/s41556-021-00807-6. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35013556/
4. Wang, Yu. 2014. RING finger protein 4 (RNF4) derepresses gene expression from DNA methylation. In The Journal of biological chemistry, 289, 33808-13. doi:10.1074/jbc.C114.611558. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25355316/
5. Nishida, Tamotsu, Yamada, Yoshiji. 2020. RNF4-mediated SUMO-targeted ubiquitination relieves PARIS/ZNF746-mediated transcriptional repression. In Biochemical and biophysical research communications, 526, 110-116. doi:10.1016/j.bbrc.2020.03.063. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32197837/
6. Liu, Julio C Y, Ackermann, Leena, Hoffmann, Saskia, Haahr, Peter, Mailand, Niels. 2024. Concerted SUMO-targeted ubiquitin ligase activities of TOPORS and RNF4 are essential for stress management and cell proliferation. In Nature structural & molecular biology, 31, 1355-1367. doi:10.1038/s41594-024-01294-7. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38649616/
7. Wang, Luxiang, Liu, Xiaohui, Wang, Haihong, Zhou, Jun, Zhu, Jun. 2018. RNF4 regulates zebrafish granulopoiesis through the DNMT1-C/EBPα axis. In FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology, 32, 4930-4940. doi:10.1096/fj.201701450RR. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29634367/
