智鼠故事 
C57BL/6JCya-Rhdem1flox/Cya 条件性基因敲除小鼠
复苏/繁育服务
产品名称：
Rhd-flox
产品编号：
S-CKO-04800
品系背景：
C57BL/6JCya
* 使用本品系发表的文献需注明：Rhd-flox mice (Strain S-CKO-04800) were purchased from Cyagen.
交付类型
周龄
性别
基因型
数量
只
基本信息
品系名称
C57BL/6JCya-Rhdem1flox/Cya
品系编号
CKOCMP-19746-Rhd-B6J-VA
产品编号
S-CKO-04800
基因名
Rhd
品系背景
C57BL/6JCya
基因别称
Rh；Rhl1；Rhced
NCBI号
修饰方式
条件性基因敲除
品系说明
该品系是基于策略设计时的数据库信息制作而成，建议您在购买前查询最新的数据库和相关文献，以获取最准确的表型信息。
小鼠表型
MGI:1202882 Mice homozygous for a knock-out allele exhibit decreased ammonium and methylammonium transport in red cell ghosts, reduced basal adhesion of red blood cells to endothelial cells, and a slight increase in iron levels.
质控标准
精子检测
① 冷冻前验证精子活力观察
② 冷冻验证每批次进行复苏验证
品系状态
在研小鼠
环境标准
SPF
供应地区
中国
品系详情
Rhd位于小鼠的4号染色体，采用基因编辑技术，通过高通量电转受精卵方式，获得Rhd基因条件性敲除小鼠，性成熟后取精子冻存。
Rhd-flox小鼠模型是由赛业生物（Cyagen）构建的条件性基因敲除小鼠。Rhd基因位于小鼠4号染色体上，由10个外显子组成，其中ATG起始密码子在1号外显子，TAA终止密码子在10号外显子。条件性敲除区域（cKO区域）位于3号外显子，包含约651个碱基对的编码序列。删除该区域会导致小鼠Rhd基因功能的丧失。Rhd-flox小鼠模型的构建过程包括使用基因编辑技术，将核糖核蛋白（RNP）和靶向载体共同注入受精卵。随后，对出生的小鼠进行PCR和测序分析进行基因型鉴定。此外，携带敲除等位基因的小鼠表现出减少的氨和甲基铵的转运，减少的红细胞对内皮细胞的粘附，以及铁水平的轻微增加。该模型可用于研究Rhd基因在小鼠体内的功能。
基因研究概述
RHD基因，全称为Rhesus D基因，是人类Rh血型系统中的关键基因之一。Rh血型系统是人类血型系统中最复杂的系统之一，由RHD和RHCE两个紧密相邻的基因编码。RHD基因位于1号染色体短臂1p34.1-1p36区域，编码RhD抗原，而RHCE基因编码RhCE抗原。这两个基因在决定个体的Rh血型方面起着重要作用。
RhD抗原在红细胞表面表达，是Rh血型系统中最具免疫原性的抗原之一。RHD基因的缺失或突变会导致RhD抗原表达缺失或减弱，从而产生RhD阴性（D-）表型。RhD阴性个体在输血或孕妇分娩时可能会产生抗D抗体，导致输血反应或新生儿溶血性疾病（HDN）。
在亚洲人群中，RhD阴性个体中存在一种特殊的表型，称为Del表型。Del表型的个体在常规血清学检测中表现为RhD阴性，但其红细胞表面仍然表达少量的RhD抗原。研究表明，Del表型的个体在接受RhD阳性（D+）红细胞输血后不会产生抗D抗体，因此可以安全地输注D+红细胞。这一发现对于Del表型患者的临床输血管理具有重要意义[1]。
RHD基因的缺失通常发生在两个称为Rhesus盒的DNA片段之间，这两个片段具有高度同源性。Rhesus盒位于RHD基因的两侧，长度约为9000个碱基对，含有1463个碱基对的同源序列。RHD基因的缺失通常发生在Rhesus盒内的同源序列中，导致RhD抗原表达缺失或减弱。通过PCR-SSP、PCR-RFLP等分子生物学方法可以特异性地检测RHD基因的缺失[2]。
在RhD阴性个体中，RHD基因的缺失是常见的现象。例如，在日本RhD阴性捐赠者中，有27.7%的个体存在RHD基因。这些个体中，RHD基因可能存在完整的基因序列，也可能存在部分缺失或突变。RHD基因的缺失与RhC表型之间存在一定的关联性，RhC阳性的个体更可能存在RHD基因[3]。
在台湾地区，RHD基因的多态性在RhD阴性个体中也得到了研究。研究发现，在230个RhD阴性样本中，有67.4%的个体确实为RhD阴性，而32.6%的个体表现为Del表型。Del表型的个体中，所有样本都携带完整的RHD基因，但RhD抗原表达较弱。此外，还发现了其他类型的RHD基因多态性，包括RHD基因部分缺失和RHD基因完全缺失的个体[4]。
为了减少不必要的抗D免疫球蛋白预防，非侵入性胎儿RHD基因分型技术在RhD阴性孕妇中的应用得到了研究。研究发现，通过采集孕妇的血液样本，并使用PCR技术扩增RHD基因的特定外显子，可以准确预测胎儿的RHD基因型。这一技术对于RhD阴性孕妇的输血管理和新生儿溶血性疾病的预防具有重要意义[5]。
综上所述，RHD基因是人类Rh血型系统中的关键基因，其缺失或突变导致RhD抗原表达缺失或减弱，产生RhD阴性表型。RHD基因的缺失通常发生在Rhesus盒内的同源序列中。Del表型的个体在接受RhD阳性红细胞输血后不会产生抗D抗体，可以安全地输注D+红细胞。RHD基因的多态性在RhD阴性个体中存在，包括RHD基因部分缺失和RHD基因完全缺失的个体。非侵入性胎儿RHD基因分型技术可以准确预测胎儿的RHD基因型，对于RhD阴性孕妇的输血管理和新生儿溶血性疾病的预防具有重要意义。
参考文献：
1. Ji, Yanli, Luo, Yalin, Wen, Jizhi, Zhang, Rui, Fu, Yongshui. . Patients with Asian-type DEL can safely be transfused with RhD-positive blood. In Blood, 141, 2141-2150. doi:10.1182/blood.2022018152. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36638337/
2. Wagner, F F, Flegel, W A. . RHD gene deletion occurred in the Rhesus box. In Blood, 95, 3662-8. doi:. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10845894/
3. Okuda, H, Kawano, M, Iwamoto, S, Okubo, Y, Kajii, E. . The RHD gene is highly detectable in RhD-negative Japanese donors. In The Journal of clinical investigation, 100, 373-9. doi:. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9218514/
4. Sun, C F, Chou, C S, Lai, N C, Wang, W T. . RHD gene polymorphisms among RhD-negative Chinese in Taiwan. In Vox sanguinis, 75, 52-7. doi:. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9745154/
5. Hyland, Catherine A, Millard, Glenda M, O'Brien, Helen, Hyett, Jonathan A, Gardener, Glenn J. 2017. Non-invasive fetal RHD genotyping for RhD negative women stratified into RHD gene deletion or variant groups: comparative accuracy using two blood collection tube types. In Pathology, 49, 757-764. doi:10.1016/j.pathol.2017.08.010. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29096879/
