Ro60-KO 基因敲除小鼠

Ro60，也称为SSA2，是一种60千道尔顿的环状蛋白质，它是Ro核糖核蛋白（RNPs）复合物的主要成分，Ro60 RNPs由Ro60蛋白和非编码RNA（称为Y RNA）组成。Ro60 RNPs存在于生命的三域中，包括原核生物、真核生物和古菌。Ro60最初是在风湿性疾病患者中被描述为一种自身抗原，在3%至5%的细菌基因组中也发现了Ro60的直系同源物，涵盖了大多数门类。在Deinococcus radiodurans中，Ro60的直系同源物增强了3'-to-5'外切核酸酶在多种环境应激下降解结构RNA的能力。Y RNA是调节因子，抑制或允许Ro60与其他蛋白质和RNA的相互作用。在细菌中Ro60 RNPs的研究表明了其他功能，因为最保守的Y RNA包含一个与tRNA相似的域，并且Ro60 RNPs通常编码在RNA修复系统的组件旁边[1]。

Ro60自身抗原与内源性逆转录元件结合，并调节炎症基因的表达。自身抗体在系统性红斑狼疮（SLE）和干燥综合征中靶向RNA结合蛋白Ro60。然而，Ro60及其相关RNA是否参与疾病发病机制尚不清楚。在人类细胞系中，Ro60相关的RNA包括从内源性Alu逆转录元件衍生的RNA基序。Alu转录本由I型干扰素诱导，并刺激人外周血细胞的促炎细胞因子分泌。Ro60缺失导致Alu RNA和干扰素调节基因的表达增强。SLE免疫复合物中的抗Ro60阳性含有Alu RNA，并且与对照相比，SLE全血样本中的Alu转录本上调。这些发现建立了狼疮自身抗原Ro60、Alu逆转录元件和I型干扰素之间的联系[2]。

Ro60/SSA的水平增加并促进胰腺导管腺癌的进展。Ro60/SSA是Sjogren's综合征和系统性红斑狼疮（SLE）中被靶向的一种重要自身抗原。然而，它在实体瘤中的作用很少被报道。本研究通过体外和体内研究了Ro60/SSA在胰腺导管腺癌（PDAC）发展中的表达和功能。免疫组化用于使用组织微阵列芯片检测PDAC和正常胰腺组织中Ro60/SSA的表达。结果显示，与正常胰腺组织相比，PDAC组织中Ro60/SSA的表达增加。通过siRNA转染敲低Ro60/SSA显著降低了细胞增殖和侵袭。此外，敲低Ro60/SSA抑制了皮下肿瘤的生长。因此，Ro60/SSA可能在PDAC的发展中发挥新功能。它促进胰腺癌的增殖、迁移和侵袭。因此，它可能代表胰腺癌管理的一个新的分子靶点[3]。

Ro60在DSS诱导的结肠炎小鼠模型中抑制结肠炎和纤维化。炎症性肠病（IBD）是由胃肠道慢性炎症引起的。IBD的发病机制尚不清楚。炎症与T辅助（Th）淋巴细胞的激活和促炎细胞因子的慢性产生有关。Ro60通过抑制Alu转录抑制肿瘤坏死因子α、白细胞介素（IL）-6和干扰素α的表达；因此，控制Ro60 mRNA表达可能具有治疗作用。然而，很少有研究评估Ro60的抗炎活性。Ro60水平在IBD患者中降低；因此，我们假设Ro60参与自身免疫性疾病的发展。我们使用过表达Ro60三倍的载体，将基因治疗用于DSS诱导的结肠炎小鼠。我们通过反复称重小鼠来评估IBD进展。Ro60改善了结肠炎的严重程度，并降低了肿瘤坏死因子α、IL-6、IL-17、IL-8和血管内皮生长因子的水平。Ro60过表达降低了α-平滑肌肌动蛋白（活化的成纤维细胞的标志物）和I型胶原的水平。Ro60的抗炎和抗纤维化活性通过抑制炎症、纤维化、血管生成和活性氧的产生来改善DSS诱导的结肠炎的严重程度[4]。

长链非编码RNA distal-less homeobox 2反义1通过结合microRNA-330-3p调节Ro60，Y RNA结合蛋白，抑制牙周膜细胞的炎症反应和凋亡。该研究旨在调查长链非编码RNA distal-less homeobox 2反义1（DLX2-AS1）在脂多糖诱导的牙周膜细胞（PDLCs）炎症反应和凋亡中的作用。使用脂多糖诱导PDLCs的炎症反应。通过逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测脂多糖处理后PDLCs中DLX2-AS1、microRNA-330-3p和Ro60，Y RNA结合蛋白（RO60）的表达。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）评估DLX2-AS1过表达或RO60下调后PDLCs中炎症细胞因子的浓度。通过流式细胞术分析分析脂多糖处理或指示转染后PDLCs的凋亡。通过蛋白质印迹检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的水平。通过荧光素酶报告基因分析验证microRNA-330-3p与DLX2-AS1（或RO60）之间的结合能力。脂多糖处理后PDLCs中DLX2-AS1下调。DLX2-AS1过表达降低了炎症细胞因子的产生并抑制了细胞凋亡。microRNA-330-3p与DLX2-AS1结合，并在脂多糖诱导的PDLCs中高表达。此外，下调RO60（microRNA-330-3p的靶基因）逆转了DLX2-AS1过表达对PDLCs炎症反应和凋亡的抑制作用。DLX2-AS1通过microRNA-330-3p/RO60轴抑制PDLCs的炎症反应和凋亡[5]。

综上所述，Ro60蛋白在多种生物学过程中发挥着重要作用。Ro60在细菌中通过增强外切核酸酶的活性来降解结构RNA，在人类中则参与炎症反应的调节。Ro60还与自身免疫性疾病的发生有关，如SLE和干燥综合征。此外，Ro60在癌症的发展中也发挥着重要作用，如胰腺导管腺癌。Ro60的研究为理解RNA的稳定性和功能、基因表达和生物学过程的调控提供了重要的信息，同时也为疾病的治疗和预防提供了新的思路和策略。