Tlr9-KO 基因敲除小鼠

Toll样受体9（TLR9）是一种细胞内先天免疫受体，在慢性炎症和识别病原性和自身DNA的免疫复合物中发挥着重要作用。TLR9的激活通过特定的转录因子导致免疫相关或恶性基因的转录。因此，人们推测TLR9可能引起胶质瘤。TLR9介导脑癌细胞在脑组织中的侵袭性缺氧，通过激活基质金属蛋白酶（2、9和13）。相比之下，TLR9激动剂CpG ODN与放射治疗的结合增强了T细胞在抗肿瘤效应中的作用。TLR9激动剂CpG ODN 107还通过阻断肿瘤血管生成增强了人胶质瘤U87细胞的放射敏感性。CpG在体外和体内增强凋亡，还可以增强小胶质细胞的抗原呈递能力，将免疫反应转向CD8 T细胞，并减少CD4CD25 Treg细胞的数量。CpG ODN作为一种强大的免疫治疗药物对抗癌症具有希望，但在激活TLR9时，尤其是在胶质母细胞瘤的情况下，应采取特定的预防措施[4]。

在安哥拉儿童中，TLR4和TLR9的基因多态性与流感嗜血杆菌性脑膜炎的易感性和预后相关。在这项研究中，我们确定TLR4和TLR9的单核苷酸多态性（SNPs）是否与安哥拉儿童对细菌性脑膜炎（BM）的易感性和预后相关。我们从241名患者和265名年龄匹配的对照组中收集了样本。通过高分辨率熔解分析（HRMA）确定了TLR4 rs4986790（896A > G）和TLR9 rs187084（-1486T > C）的SNPs。与流感嗜血杆菌性脑膜炎患者相比，TLR4的变异基因型频率在对照组中显著更高（优势比（OR），2.5；95%置信区间（CI），1.2-5.4；p = 0.021），而TLR9的变异基因型频率在流感嗜血杆菌性脑膜炎患者中显著低于对照组（OR，0.4；95% CI，0.2-0.9；p = 0.036）。在出院时，携带变异TLR4基因型的由革兰氏阴性细菌引起的脑膜炎患者比野生型TLR4基因型的患者发生共济失调（OR，12.91；95% CI，1.52-109.80；p = 0.019）和其他神经后遗症（OR，11.85；95% CI，1.07-131.49；p = 0.044）的风险更高。我们的研究表明，安哥拉儿童中流感嗜血杆菌性脑膜炎与TLR4和TLR9之间的遗传变异相关[1]。

TLR9基因多态性与江苏中国人群中的幽门螺杆菌感染风险相关。幽门螺杆菌感染是一种常见的感染性疾病，与多种胃肠道疾病有关。为了更好地了解TLR9基因多态性与幽门螺杆菌感染之间的关系，并为医院护士的精准护理提供基础和风险评估，我们收集了630名正常体检对象，包括240名幽门螺杆菌阳性者和390名幽门螺杆菌阴性者。PCR-RFLP被应用于研究当前的变异。同时，对TLR9基因多态性与幽门螺杆菌感染风险之间的荟萃分析进行了。观察到TLR9基因rs187084多态性的三种基因型（TT、TC和CC）。CC基因型和C等位基因负责显著的关联（所有P < 0.05）。荟萃分析发现，在任何遗传模型中均未发现显著关联（所有P > 0.05）。TLR9多态性在幽门螺杆菌感染风险中起着至关重要的作用，CC基因型在江苏中国人群中增加了幽门螺杆菌感染的风险。在了解TLR9基因多态性对幽门螺杆菌感染的影响后，护士可以改善幽门螺杆菌感染的风险评估，并提供更个性化的健康教育[2]。

TLR9基因多态性与肺结核风险相关。肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，对全球公共卫生构成严重威胁。先前的研究表明，TLR9基因中的单核苷酸多态性（SNPs）可能与肺结核风险相关。然而，研究结果不一致且结论不明。在这项研究中，我们从四个数据库中纳入了1745篇文章。通过比较不同的遗传模型，我们对七种多态性与肺结核风险之间的关联进行了荟萃分析。在这项系统回顾中，我们分析了来自七篇英文文章的8项研究。我们的结果表明，rs352139与肺结核风险显著相关（AA vs. AG，OR 0.77，95% CI 0.65-0.92，P = 0.004）。在民族亚组分析中，具有AA基因型的印尼人易感性降低，而具有GG等位基因的墨西哥人易感性增加。荟萃分析表明，rs352139多态性可能与印尼人肺结核风险降低相关，而与墨西哥人肺结核风险增加相关。观察到的关联是否由于因果效应需要进一步研究[3]。

鼻咽癌（NPC）是一种与EB病毒（EBV）感染密切相关的疾病。TLR9是介导EBV与宿主免疫反应之间相互作用的重要因子。TLR9基因的任何遗传（单核苷酸多态性，SNPs）或表达变异都可能改变受体的能力，以正确地响应病毒感染，如NPC。这项研究旨在评估TLR9功能性多态性（TLR9-1486 T/C和TLR9-1237 T/C）和TLR9 mRNA表达在NPC严重程度和进展中的作用。这项研究包括322名NPC患者。RFLP-PCR和实时PCR分别用于评估TLR9基因的基因型和mRNA表达。基因分型分析显示，突变等位基因-1237C（TLR9-1237 TC+CC）的存在与较大的肿瘤大小相关（p = 0.017；OR（CI 95%）= 1.888（1.11-3.19））。治疗后，-1237C等位基因与完全缓解的可能性更高相关（p = 0.031，OR（CI 95%）= 0.486（0.25-0.95）），远处转移的风险更低（p = 0.028，OR（CI 95%）= 0.435（0.18-1.02）），NPC死亡的风险更低（p = 0.003，OR（CI 95%）= 0.20（0.06-0.67））。Kaplan-Meier分析显示，具有-1237CC和-1237TC基因型的患者具有更好的总生存期（OVS）（p < 0.01）和远处转移无病生存期（DMFS）（p < 0.05）。多变量分析表明，TLR9-1237 T/C多态性是OVS（p = 0.02；HR = 0.244）和DMFS（p = 0.048；HR = 0.388）的独立预后因素。转录组分析显示，mRNA表达在较大的肿瘤大小（T4）（p = 0.013）和较晚的临床阶段（SIII-SIV）（p = 0.037）的患者中降低。在诊断时，TLR9 mRNA表达与肿瘤大小呈负相关（p = 0.014；r = -0.314）。我们的结果表明，功能性-1237 T/C多态性和TLR9基因的mRNA表达可能是NPC严重程度和进展的保护因素[5]。

DNA基因疗法的免疫刺激作用是DNA基因疗法的一个关键问题，它对疗法的后果有重大影响。这是由于TLR9对DNA序列中非甲基化的CpG基序的识别。然而，最近的研究表明，TLR9可以识别非CpG基序，并在DNA有效地传递到TLR9时诱导细胞活化，例如通过阳离子脂质。此外，最近的研究表明，TLR9非依赖性免疫活化也可能发生。在这里，我们试图概述DNA的免疫活化，以优化DNA基因疗法[6]。

在II型糖尿病骨质疏松症（T2DOP）小鼠模型中，TLR9基因缺失与抑制核因子-κB（NF-κB）信号通路相关，介导骨折愈合。糖尿病的特点是骨折风险增加。在糖尿病中缺乏抗骨折策略的证据。我们的微阵列分析预测TLR9与糖尿病和骨质疏松症相关，这是我们在T2DOP小鼠模型中的工作重点。在TLR9敲除（TLR9-/-）小鼠中建立了T2DOP模型并发生骨折，然后分别用NF-κB信号通路抑制剂（PDTC）和激活剂（TNF-α）进行治疗。获得的数据表明，TLR9敲除增强了骨组织再生和骨痂中的软骨面积，并减少了T2DOP小鼠中的纤维组织。此外，TLR9缺失显著影响了骨密度（BMD）、骨体积/组织体积（BV/TV）、连接密度、骨小梁数量、骨小梁分离和骨小梁厚度，从而促进骨折恢复。在T2DOP小鼠中，骨形态和结构对TLR9缺失的反应也得到了改善。TLR9缺失在T2DOP小鼠中使NF-κB信号通路失活。发现PDTC增强了T2DOP小鼠的骨折愈合，而TNF-α则抵消了这种效果。总的来说，这些数据表明，TLR9缺失可能具有抗骨折特性，使其成为T2DOP的潜在治疗靶点[7]。

免疫性血小板减少症（ITP）是一种以低血小板计数和出血风险增加为特征的自体免疫性疾病。导致抗血小板自身免疫的初始事件（s）尚不清楚。Toll样受体（TLRs）是特征最明显的模式识别受体，是由Toll基因家族编码的跨膜蛋白。除了在免疫中发挥保护作用外，TLRs还表现出稳态作用。Toll样受体在疾病的发生和发展中发挥潜在作用，并维持其发展。这项研究的目的是评估TLR9基因C/T（rs352140）多态性的分布及其与埃及成人原发性ITP的临床病理特征之间的可能关联。这项研究是在埃及曼努菲亚大学医院内科部门进行的，从2018年8月到2020年1月。80名成年人（≥ 18岁）参加了这项研究；40名原发性ITP患者和40名健康个体作为对照组。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性识别TLR9 C/T（rs352140）多态性变体。在我们的研究中，我们排除了其他导致继发性ITP的原因。TLR9 C/T基因型的分布没有表现出患者和对照组之间的显著偏差。在研究的组别中，等位基因（C和T）的频率没有显著差异。埃及成人原发性ITP与TLR9基因C/T（rs352140）多态性之间没有显著差异。TLR9基因C/T（rs352140）多态性与埃及人原发性ITP的任何临床血液学变量无关[8]。

宫颈炎是妇女中主要的健康问题之一，由包括沙眼衣原体（CT）、淋病奈瑟菌（NG）、阴道毛滴虫（TV）以及人乳头瘤病毒（HPV）在内的多种病原体感染引起，持续的宫颈炎症是宫颈癌的病因之一。Toll样受体（TLRs）在识别和随后消除这些病原体中起着重要作用。Toll样受体基因的变异独立地影响对病原体的易感性和疾病进展。在130名宫颈炎患者和150名对照组中分析了10个单核苷酸多态性，TLR4和TLR9基因各有5个。使用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性或等位基因特异性PCR。在宫颈炎患者中，TV感染的发生频率最高（30.7%），而CT（1.5%）、NG（2.3%）和HPV（4.6%）感染的发生频率较低。TLR4 rs11536889 CC（年龄调整后的OR，2.469 [95% CI，1.499至4.065]；p < 0.001）和TLR9 rs187084 TC（年龄调整后的OR，2.165 [95% CI，1.267-3.699]；p = 0.005）基因型在宫颈炎患者中的分布高于对照组。此外，与对照组相比，TLR4 rs11536889 C等位基因增加了宫颈炎的风险（年龄调整后的OR，1.632 [95% CI，1.132至2.352]；p = 0.009）。TLR4单倍型GCA（OR，0.6 [95% CI，0.38-0.95]；p = 0.0272）和TLR9单倍型GTA（OR，1.99 [95% CI，1.14-3.48]；p = 0.014）被发现与宫颈炎的风险降低和增加相关。TLR4和TLR9多态性以及单倍型被发现调节宫颈炎的风险[9]。

MTMR3风险等位基因增强了TLR9诱导的IgA免疫在IgA肾病中的作用。IgA肾病（IgAN）是一种常见的肾小球疾病，与多种遗传和环境因素相关。多项全基因组关联研究（GWASs）已一致地确定了MTMR3/HORMAD2/LIF/OSM位点与IgAN相关。然而，因果变异（s）、涉及的基因（s）和改变的机制仍然知之甚少。在这里，我们基于包含2762例IgAN病例和5803名对照个体的GWAS数据集进行了精细定位分析，并确定了rs4823074作为候选因果变异，该变异在B淋巴细胞中与MTMR3启动子相交。孟德尔随机化研究表明，风险等位基因可能通过影响血清IgA水平来调节疾病易感性，从而增加MTMR3表达。一致地，在IgAN患者的周围血单个核细胞中观察到MTMR3表达升高。进一步的体外机制研究表明，MTMR3增加了其磷脂酰肌醇3-磷酸结合结构域依赖的IgA产生。此外，我们的研究提供了体内功能性证据，表明Mtmr3-/-小鼠表现出TLR9诱导的IgA产生缺陷、肾小球IgA沉积以及系膜细胞增殖。RNA-seq和通路分析显示，MTMR3缺陷导致IgA产生的肠道免疫网络受损。因此，我们的结果表明，MTMR3在IgAN发病机制中的作用是通过增强TLR9诱导的IgA免疫[10]。

综上所述，TLR9在多种疾病中发挥着重要作用，包括流感嗜血杆菌性脑膜炎、幽门螺杆菌感染、肺结核、鼻咽癌、宫颈炎和IgA肾病。TLR9的激活和功能调节对于维持免疫平衡和疾病的发生发展至关重要。TLR9的研究有助于深入理解先天免疫的机制，为疾病的治疗和预防提供新的思路和策略。