Aen-KO 基因敲除小鼠

AEN（Apoptosis-enhancing nuclease）是一种新型的核外切核酸酶，它是由p53直接调控的基因。AEN在细胞凋亡过程中发挥着重要的作用，尤其是在p53依赖的细胞凋亡过程中。AEN具有保守的外切核酸酶结构域Exo I-III，能够靶向单链和双链DNA以及RNA。AEN能够通过自身诱导细胞凋亡，其保守结构域对于AEN的核酸酶活性和诱导凋亡的能力至关重要。

AEN具有核和核仁定位信号，在细胞凋亡诱导过程中从核仁转移到核质。AEN的这种定位转移与核磷蛋白的位移相关联，表明AEN在核仁破坏方面具有能力。此外，AEN在p53依赖的细胞凋亡过程中对于高效的DNA片段化是必需的。这些结果表明AEN是p53在细胞凋亡诱导过程中的重要下游介质[1]。

AEN是一种DEDDh外切核酸酶家族成员，与人类干扰素刺激基因20蛋白（ISG20）同源。AEN在MARC-145细胞感染猪流行性腹泻病毒（PEDV）时表达显著上调，而病毒复制增加时AEN蛋白含量减少。研究发现PEDV的nsp1和nsp5介导了AEN产生的减少，表明AEN的增加不利于病毒复制。通过比较AEN和其外切核酸酶失活突变体AEN-4A，确定AEN的抗病毒活性与其外切核酸酶功能无关。qPCR分析表明，AEN和AEN-4A能够显著增加IFN-α、IFN-β和ISGs（OASL、IFI44、IFIT2、ISG15、Mx1、Mx2）的转录水平，其中AEN-4A的诱导能力更高。过表达AEN和AEN-4A在MARC-145细胞中针对IFN-β敲低或IFN缺乏的Vero细胞中显示出抗病毒活性的降低或完全丧失，表明AEN可能激活I型IFN免疫反应，促进ISGs的表达，从而抑制PEDV复制[2]。

KSHV的ORF57是一种裂解期RNA结合蛋白，通过RNA结合免疫沉淀（CLIP）和RNA测序（CLIP-seq）发现FOS和CITED2 RNA是ORF57的常见RNA靶点。FOS与JUN形成二聚体，作为转录因子AP-1参与细胞增殖、分化和转化。敲除KSHV基因组中的ORF57基因导致BAC16-iSLK细胞在KSHV裂解感染时无法表达FOS。ORF57蛋白不调节FOS的翻译，而是结合到FOS RNA 5'端附近的13-nt RNA基序上，将FOS mRNA的半衰期延长7.7倍。ORF57与FOS RNA的结合与宿主核酸酶AEN（也称为ISG20L1）的结合竞争。KSHV感染抑制AEN的表达，但不影响外泌体RNA解旋酶MTR4。由ORF57介导的FOS表达通过FOS结合到AEN启动子来抑制AEN转录，但通过FOS结合到RGS2启动子中的保守AP-1位点来激活RGS2，RGS2是G蛋白偶联受体的调节因子。FOS结合到RGS2启动子并增强RGS2表达，以磷酸化AKT。综上所述，我们发现了KSHV ORF57特异性结合并稳定FOS RNA，从而增加FOS表达，从而干扰宿主基因表达并在KSHV裂解感染期间诱导病理发生[3]。

在KSHV裂解感染中，FOS，作为癌基因转录因子AP-1的异源二聚体成分，在KSHV感染细胞中高度升高，这可能是由于病毒裂解RNA结合蛋白ORF57的表达，后者结合到FOS RNA 5'端附近的13-nt RNA基序上，将FOS RNA的半衰期延长。ORF57与FOS RNA的结合可能与宿主RNA不稳定性因子（如AEN）的结合竞争。KSHV感染抑制宿主核酸酶AEN的表达，但不影响MTR4。由ORF57介导的FOS表达通过FOS结合到AEN启动子来抑制AEN转录，但通过FOS结合到RGS2启动子中的保守AP-1位点来激活RGS2，从而增强RGS2表达和AKT磷酸化。因此，KSHV裂解感染通过控制基因表达来促进病毒致瘤性[4]。

通过分析12个免疫和CAF相关基因（ICRGs）的表达，建立了结肠腺癌（COAD）的预后签名。单变量和最小绝对收缩和选择算子（LASSO）Cox回归分析用于基于这些基因的表达建立预后签名。该签名在内部和外部队列中得到了验证，并且其C指数高于之前的COAD签名，证明了其稳健性和可靠性。为了在临床环境中使用该签名，开发了包含ICRG签名和关键临床参数（如年龄和T阶段）的nomogram。此外，通过体外细胞毒性实验验证了S1PR5在COAD免疫反应中的作用。开发出的nomogram与仅ICRG签名相比，预测精度略有提高，如受试者工作特征曲线下的面积（AUC，nomogram:0.838；ICRGs:0.807）所示。该研究还评估了基于ICRGs表达的风险评分（RS）与其他关键免疫治疗变量之间的关系，包括免疫检查点表达、免疫表型评分（IPS）和微卫星不稳定性（MSI）。整合这些变量导致更精确地预测治疗效果，为COAD患者提供个性化的免疫治疗[5]。

综上所述，AEN是一种重要的核外切核酸酶，在细胞凋亡和病毒复制中发挥重要作用。AEN在p53依赖的细胞凋亡过程中对于高效的DNA片段化是必需的。AEN还可能通过激活I型IFN免疫反应和促进ISGs的表达来抑制病毒复制。此外，AEN还可能通过干扰宿主基因表达来促进病毒致瘤性。AEN的研究有助于深入理解细胞凋亡和病毒复制过程中的分子机制，为疾病的治疗和预防提供新的思路和策略。