E2f8-KO 基因敲除小鼠

E2F8是一种多功能的转录因子，它在人类癌症中扮演着重要的角色。E2F8可以调节多种细胞过程，包括细胞增殖、分化、DNA修复、细胞周期和细胞凋亡。E2F8的表达异常与大多数人类癌症的预后不良相关，但E2F8也表现出肿瘤抑制作用，因此，E2F8在细胞命运决定中的作用尚不清楚[1]。

E2F8是一个新近发现的E2F家族成员，具有一个重复的DNA结合域特征，与E2F1-6不同，它以不依赖于二聚化伴侣的方式控制基因表达。E2F8在血管生成、淋巴生成和胚胎发育中不可或缺。虽然E2F8和E2F7在许多细胞代谢中表现出互补和重叠的功能，但E2F8，而不是E2F7，在肝细胞癌（HCC）中显著过表达，通过激活E2F1/细胞周期蛋白D1信号通路来调节细胞周期进展的G1到S相转变或转录抑制CDK1以诱导肝细胞多倍体化，从而促进HCC的发生和发展[2]。

E2F8在宫颈癌的进展中也起着重要作用。E2F8在体外和体内实验中被敲低后，细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低。临床数据表明，E2F8是宫颈癌患者无进展生存期的重要预测因素，E2F8高表达的患者FIGO分期高，复发率也更高[3]。

在人类胎盘的研究中，E2F8在绒毛外滋养层细胞（EVTs）中存在，但与小鼠胎盘不同，它可能抑制EVTs的侵袭性。E2F8在细胞柱中的细胞滋养层细胞中也有存在，这些细胞没有侵袭性，分化成EVTs。因此，E2F8在人类胎盘中的功能可能与小鼠胎盘中的功能不同[4]。

E2F8与乳腺癌的化疗耐药性也有关。E2F8敲低抑制了细胞生长并减弱了同源重组修复。E2F8敲低使癌细胞对阿霉素和顺铂敏感。中心粒蛋白L（CENPL）是E2F8的一个转录靶点。在E2F8敲低的细胞中，CENPL过表达至少部分恢复了E2F8对DNA损伤修复和化疗敏感性的影响。一致地，CENPL敲低损害了DNA损伤修复，并使癌细胞对DNA损伤药物敏感。这些发现表明，靶向E2F8-CENPL通路可能是克服化疗耐药性的潜在方法[5]。

E2F8在卵巢癌的进展中也起着重要作用。卵巢癌组织中E2F8的表达显著高于正常卵巢组织。临床数据显示，E2F8是卵巢癌患者无进展生存期的显著预测因子。此外，E2F8高表达的患者预后较差。体外实验表明，E2F8敲低抑制了细胞增殖、迁移和肿瘤侵袭。此外，E2F8是上皮-间质转化（EMT）和Notch信号通路相关标记物的强诱导剂和调节剂。体内实验证实，E2F8敲低与肿瘤大小和重量减少显著相关。这些发现表明，E2F8与卵巢癌的进展高度相关。因此，E2F8可以作为卵巢癌的预后标记和治疗靶点[6]。

E2F8在肺癌中也是一个潜在的新的治疗靶点。肺癌肿瘤过度表达E2F8，与正常肺组织相比，E2F8的表达显著增加。E2F8耗竭抑制了细胞增殖和肿瘤生长。E2F8敲低显著降低了UHRF1的表达（约60%-70%，P < .001），并确定了E2F8在UHRF1启动子上的直接结合。Kaplan-Meier分析显示，E2F8表达异常在肺癌中具有预后意义（HR = 1.91 95% CI = 1.21至3.01，化疗初治患者P = .0047）。这些发现表明，E2F8在肺癌细胞中过表达，是肺癌细胞生长所必需的，因此E2F8是肺癌治疗的潜在新靶点[7]。

E2F8在出生后肝脏发育中的肿瘤抑制中起着关键作用。E2F介导的细胞周期依赖性基因表达的转录抑制对于控制细胞增殖、存活和发育至关重要。E2F信号还与癌症发展的遗传预测因子的下游转录程序相互作用，包括肝细胞癌（HCC）。在这里，我们评估了非典型抑制基因E2f7和E2f8在成年肝脏生理中的作用。使用几种基因敲除小鼠，我们发现，肝细胞中E2f7和E2f8的联合缺失导致HCC。时间特异性基因敲除策略表明，E2f8的肿瘤抑制功能在出生后肝脏发育的前两周至关重要，这段时间对应于肝脏高度增殖的阶段。破坏E2F8的DNA结合活性复制了E2f8基因敲除的影响，导致HCC。最后，在年轻小鼠和肿瘤小鼠中进行的染色质占位和基因表达分析确定了一组E2F7和E2F8的共同靶点，这些靶点在出生后早期肝脏发育中的表达增加与HCC的进展相关。与健康患者相比，HCC患者的人类肝脏活检中也观察到了E2F8特异性靶基因表达的增加。总之，这些研究表明，E2F8介导的转录抑制是出生后肝脏发育中的关键肿瘤抑制机制[8]。

E2F8通过Wnt/β-连环蛋白通路在卵巢癌中抑制细胞增殖并诱导细胞周期阻滞。E2F8敲低抑制了细胞增殖并诱导了卵巢癌细胞中的细胞周期阻滞。此外，沉默E2F8抑制了Wnt/β-连环蛋白信号通路。在E2F8敲低的卵巢癌细胞中，β-连环蛋白的过表达恢复了细胞增殖和细胞周期进展的抑制能力。因此，我们的结果表明，E2F8参与卵巢癌的发展，可能作为治疗靶点[9]。

E2F8在复发性流产（RM）中通过调节滋养层细胞侵袭性发挥作用。RM与绒毛外滋养层细胞（EVTs）功能障碍有关，但其综合机制尚不清楚。我们分析了来自Gene Expression Omnibus（GEO）数据库的单细胞RNA测序（scRNA-seq）、全转录组RNA测序和微阵列数据集，以探索RM机制中的枢纽基因。我们发现，RM的EVTs中有1724个差异表达基因（DEGs），它们都沿着EVTs的轨迹表达。这些DEGs与缺氧和葡萄糖代谢相关。单细胞调控网络推断和聚类（SCENIC）分析表明，E2F转录因子（E2F）8（E2F8）是这些DEGs的关键转录因子。RNA测序分析表明，ENO1的表达可以被E2F8正调控。随后，我们进行了免疫荧光检测（IF）、质粒转染、蛋白质印迹、染色质免疫沉淀（ChIP）、实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Transwell实验进行验证实验。我们发现，RM的胎盘中的α-烯醇化酶1（ENO1）表达较低。重要的是，E2F8可以通过抑制分泌的Frizzled相关蛋白1/4（SFRP1/4）来激活Wnt信号通路，从而转录调节ENO1的表达，促进滋养层细胞的侵袭。我们的结果表明，ENO1可以通过E2F8依赖性方式促进滋养层细胞的侵袭，突出了RM生理机制中一个新的潜在靶点[10]。

综上所述，E2F8是一种多功能的转录因子，在人类癌症中发挥着重要的作用。E2F8可以调节多种细胞过程，包括细胞增殖、分化、DNA修复、细胞周期和细胞凋亡。E2F8的表达异常与大多数人类癌症的预后不良相关，但E2F8也表现出肿瘤抑制作用，因此，E2F8在细胞命运决定中的作用尚不清楚。E2F8在多种癌症中表现出过表达，包括肝细胞癌、宫颈癌、乳腺癌、卵巢癌和肺癌，并且与不良预后相关。E2F8可以通过多种信号通路发挥作用，包括E2F1/细胞周期蛋白D1信号通路、上皮-间质转化（EMT）和Notch信号通路、Wnt/β-连环蛋白通路和分泌的Frizzled相关蛋白1/4（SFRP1/4）通路。此外，E2F8在出生后肝脏发育中也起着关键的肿瘤抑制功能。因此，E2F8可以作为多种癌症的预后标记和治疗靶点，有助于深入理解癌症的发病机制，为癌症的治疗和预防提供新的思路和策略。