Cldn18-flox 基因敲除小鼠

Cldn18，也称为Claudin 18，是一种紧密连接蛋白，主要在非恶性的胃上皮细胞中表达。在恶性转化过程中，Cldn18.2的表达上调，使其在肿瘤细胞表面变得可及，因此成为一个有吸引力的癌症治疗靶点[4]。Cldn18.2的表达在正常组织中严格局限于胃黏膜的分化上皮细胞，但在胃干细胞区则不表达。Cldn18.2在恶性转化过程中得以保留，并在一定比例的原发性胃癌和转移癌中表达。除了其在原位表达外，Cldn18.2在胰腺、食管、卵巢和肺癌中也有频繁的异常激活，与不同的组织学亚型相关。Cldn18.2的激活取决于转录因子cAMP反应元件结合蛋白与去甲基化共识位点的结合。最重要的是，研究者成功开发出针对Cldn18.2的单克隆抗体，这些抗体可以结合Cldn18.2，但不能结合其肺特异性剪接变体，并且能够识别癌细胞表面的抗原。Cldn18.2在正常组织中高度限制的表达模式，其在多种人类癌症中的频繁异常激活，以及能够特异性地在肿瘤细胞表面靶向这一分子的能力，使其成为一种新的、极具吸引力的泛癌靶点，适合用于上皮肿瘤的抗体治疗[4]。

在胃腺癌中，Cldn18.2的表达显著低于正常组织（p < 0.001），但在转移性淋巴结中则相似（p = 0.851）。Cldn18.2的表达与Borrmann类型、分化程度、PD-L1表达和胃癌患者的生存显著相关，并被确定为患者预后的独立风险因素（HR = 1.57，95% CI 1.16-2.11，p = 0.003）。Cldn18.2表达与HER2、Lauren类型、肿瘤大小、TNM分期或其他临床病理特征无关。在Cldn18.2阳性肿瘤中，CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的数量显著高于Cldn18.2阴性肿瘤。Cldn18.2阴性表达和显著的CD4+ T细胞或CD8+ T细胞浸润的患者预后最好（5年OS：61.0%，P = 0.036；5年OS：62.2%，P = 0.034）。因此，Cldn18.2在肿瘤组织中的表达水平较低，是胃癌患者预后的独立预后因素。此外，Cldn18.2与免疫浸润细胞和PD-L1表达相关[2]。

CLDN18-ARHGAP融合基因是胃腺癌中新发现的致癌驱动基因。研究者发现，9%的胃腺癌患者（8/87）中检测到该融合基因。研究者生成了一种特异性靶向CLDN18-ARHGAP融合基因的免疫原性肽，以诱导新抗原反应性T细胞，这在体外共培养模型和体内异种移植胃腺癌模型中被证明具有特异性和强大的抗肿瘤能力。除了免疫原性潜力外，CLDN18-ARHGAP融合基因还通过诱导调节性T（Treg）细胞富集的微环境来促进免疫抑制。机制上，具有CLDN18-ARHGAP融合的胃腺癌细胞激活PI3K/AKT-mTOR-FAS信号通路，从而增强胃腺癌细胞的游离脂肪酸产生，有利于Treg细胞的存活。此外，PI3K抑制可以有效地逆转Treg细胞的上调，以增强体外新抗原反应性T细胞的抗肿瘤细胞毒性，并减少异种移植胃腺癌模型中的肿瘤生长。该研究确定了CLDN18-ARHGAP融合基因是免疫原性新表位的关键来源，是肿瘤免疫微环境的关键调节因子，并且具有针对这一致癌融合的免疫治疗应用[3]。

胃腺癌中CLDN18-ARHGAP融合基因的富集表明，这种融合基因可能是年轻患者中侵袭性疾病和不良预后的一个因素。研究者对146名40岁或以下年龄被诊断为胃腺癌的患者进行了研究。肿瘤标本被检查幽门螺杆菌感染、EB病毒阳性以及错配修复基因的表达以指示微卫星不稳定性。通过免疫组织化学和FISH检测了18个候选驱动基因的过表达、基因扩增和重排。尽管只有少数病例EB病毒和微卫星不稳定性呈阳性（n = 2），但研究者反复发现肿瘤中存在紧密连接蛋白claudin（CLDN18）和小G蛋白调节因子ARHGAP之间的基因融合，高达22例（15.1%），RNA测序确定了2种新型融合。值得注意的是，具有CLDN18-ARHGAP融合的患者即使在按临床分期分组时，也与侵袭性疾病和不良预后相关。这些观察结果表明，CLDN18和ARHGAP之间的融合基因在年轻发病的胃腺癌中富集，其存在可能有助于其侵袭性特征[5]。

胃腺癌中CLDN18-ARHGAP融合基因是弥漫性胃腺癌的一个分子特征，也是胃腺癌的独立预后风险因素。此外，它还与多种临床特征相关，包括年龄、性别、淋巴结转移和肿瘤分期。然而，CLDN18-ARHGAP融合基因的机制和潜在的治疗策略需要进一步探索[1]。总之，Cldn18和CLDN18-ARHGAP融合基因是胃腺癌中的重要分子特征，与患者的预后和免疫微环境密切相关。针对这些分子特征的治疗策略，如靶向抗体和免疫治疗，为胃腺癌的治疗提供了新的希望。未来的研究需要进一步探索这些分子特征的机制，以及开发更有效的治疗方法，以提高胃腺癌患者的生存率。