Zfp60-flox 基因敲除小鼠

Zfp60是一种小鼠锌指基因，其完整的cDNA编码序列已经确定。预测的Zfp60蛋白氨基酸序列含有19个锌指结构，这些结构集中在C端。在N端，Zfp60与锌指基因家族的其他成员共享两个额外的保守氨基酸模块，称为Kruppel相关盒（KRAB）。在体外肌肉分化过程中，Zfp60、MyoD和MHC mRNA的表达模式已被追踪。研究显示，细菌产生的Zfp60蛋白只有在锌离子的存在下才能与DNA结合。Zfp60位点位于7号染色体，其他Zfp位点也位于该染色体上[1]。

Zfp60是一种锌指转录因子，研究表明它是软骨分化的负调节因子。使用改进的RNA指纹技术，研究人员在鼠颅骨原代培养中鉴定出Zfp60作为细胞分化的候选调节因子。在活体内，Zfp60 mRNA的表达高峰出现在胚胎发育的第11天（E11）和第15天（E15）之间，这与器官形成活跃阶段相一致。进一步分析Zfp60 mRNA和蛋白在鼠胚胎骨骼发育过程中的表达，发现最显著的表达出现在前肥大软骨细胞中，这与软骨细胞成熟的关键调节因子Indian hedgehog (Ihh)和甲状旁腺激素相关肽（PTHrP）受体的表达相一致。Zfp60 mRNA在体外C1细胞软骨发生过程中也被发现暂时性表达，先于胶原蛋白X的表达和细胞肥大。Zfp60的过表达抑制了软骨生成ATDC5细胞系的软骨分化。这些结果表明Zfp60在基因转录的负调节中发挥作用，尤其是在软骨细胞的发育和/或分化过程中[2]。

牙本质基质衍生物（EMD）刺激了未分化间充质细胞中与成骨和软骨生成相关的转录因子的表达。C3H10T1/2细胞系是一种典型的多能间充质细胞系，在培养过程中添加或未添加EMD。通过实时聚合酶链反应测量编码与成骨和软骨生成相关的转录因子的mRNA的表达。EMD显著增加了与成骨和软骨生成相关的转录因子的mRNA水平。EMD还诱导了Runx2和Sox9蛋白的表达。使用抗BMP-6抗体对EMD进行Western blot分析，揭示了与大约14 kDa和60 kDa相对应的免疫反应带。这些结果表明EMD刺激了与成骨和软骨生成相关的转录因子，这些活性可能至少部分是通过EMD中的BMP-6介导的[3]。

为了确定调节对潜在成瘾药物可卡因反应的基因，研究人员使用全基因组关联研究（GWAS）和RNA-Seq对接受静脉自我给予盐水的一组近交和重组近交小鼠进行了对照实验。线性混合模型增加了对纵向行为数据的分析统计功效，这些数据是在10天内获得的。与可卡因GWAS相比，共鉴定出145个与盐水相关的位点。只有1个位点重叠。使用来自伏隔核和内侧前额叶皮层的RNA Seq数据进行全转录组关联研究（TWASs），发现5031434O11Rik和Zfp60与盐水自我给予显著相关。另外两个基因，Myh4和Npc1，基于与多个终点相关位点或调节表达的顺式位点的接近性被提名。这四个基因以前都与运动活动有关，尽管盐水摄入与旷场中行走的距离之间没有很强的关系。这些结果表明，盐水和可卡因自我给予具有不同的遗传基础，并表明一些基因对盐水的自我给予和运动活动是共同的[4]。

设计新型基因编码人工转录因子在生物技术和医学中是一种强大的工具。研究人员设计了一种新的基于锌指的转录因子，命名为Blues，能够结合并可能修改成纤维细胞生长因子4（FGF-4，K-fgf）的表达，FGF-4最初被鉴定为一种致癌基因。Blues编码一个三锌指肽，被构建为靶向小鼠FGF-4增强子内部的9 bp DNA序列：5'-GTT-TGG-ATG-3'，接近Sox-2和Oct-3 DNA结合位点。最终目标是建立一个基于人工锌指基因的模型系统，以研究FGF-4在发育和肿瘤发生中的生物学作用[5]。

综上所述，Zfp60是一种重要的锌指转录因子，在多种生物学过程中发挥作用，包括肌肉分化、软骨分化、成骨和软骨生成，以及药物自我给予的遗传基础。Zfp60的研究有助于深入理解锌指转录因子的生物学功能和疾病发生机制，为疾病的治疗和预防提供新的思路和策略。