智鼠故事 
C57BL/6JCya-Ano6em1flox/Cya 条件性基因敲除小鼠
复苏/繁育服务
产品名称：
Ano6-flox
产品编号：
S-CKO-00468
品系背景：
C57BL/6JCya
* 使用本品系发表的文献需注明：Ano6-flox mice (Strain S-CKO-00468) were purchased from Cyagen.
交付类型
周龄
性别
基因型
数量
只
基本信息
品系名称
C57BL/6JCya-Ano6em1flox/Cya
品系编号
CKOCMP-105722-Ano6-B6J-VA
产品编号
S-CKO-00468
基因名
Ano6
品系背景
C57BL/6JCya
基因别称
Tmem16f；2900059G15Rik；F730003B03Rik
NCBI号
修饰方式
条件性基因敲除
品系说明
该品系是基于策略设计时的数据库信息制作而成，建议您在购买前查询最新的数据库和相关文献，以获取最准确的表型信息。
小鼠表型
MGI:2145890 Mice homozygous for a knock-out allele exhibit impaired platelet coagulation with increased bleeding time. Mice homozygous for a different knock out allele or gene trap exhibit decreased bone mineral deposition and skeletal abnormalities.
质控标准
精子检测
① 冷冻前验证精子活力观察
② 冷冻验证每批次进行复苏验证
品系状态
活体
环境标准
SPF
供应地区
中国
品系详情
Ano6位于小鼠的15号染色体，采用基因编辑技术，通过高通量电转受精卵方式，获得Ano6基因条件性敲除小鼠，性成熟后取精子冻存。
Ano6-flox小鼠模型由赛业生物（Cyagen）采用基因编辑技术构建。Ano6基因位于小鼠15号染色体上，由21个外显子组成，其中ATG起始密码子在1号外显子，TGA终止密码子在21号外显子。条件性敲除区域（cKO区域）位于3号外显子，包含83个碱基对的编码序列。删除该区域会导致小鼠Ano6基因功能的丧失。Ano6-flox小鼠模型的构建过程包括将核糖核蛋白（RNP）和靶向载体共同注入受精卵。随后，对出生的小鼠进行PCR和测序分析进行基因型鉴定。携带敲除等位基因的小鼠表现出受损的血小板凝固能力，出血时间增加。此外，携带不同的敲除等位基因或基因捕获的小鼠表现出骨矿物质沉积减少和骨骼异常。敲除3号外显子会导致基因移码，并覆盖编码区域的2.97%。5'-loxP位点插入的2号内含子大小为33518 bp，3'-loxP位点插入的3号内含子大小为30105 bp。有效的cKO区域大小约为1.0 kb。cKO区域没有其他已知基因。该模型可用于研究Ano6基因在小鼠体内的功能。
基因研究概述
Ano6（也称为TMEM16F）是一种编码跨膜蛋白的基因，属于TMEM16（也称为anoctamin）蛋白家族。这个家族成员在多种细胞功能中发挥着重要作用，包括离子运输、磷脂翻转和调节其他膜蛋白。Ano6具有Ca2+依赖性磷脂翻转酶活性和Ca2+激活的氯离子通道（CaCC）活性。Ano6在多种细胞类型中广泛表达，包括血小板、心肌细胞和巨噬细胞。
Ano6在血小板功能中起着重要作用。研究表明，Ano6基因的突变导致Scott综合征，这是一种罕见的遗传性出血性疾病，其特征是血小板磷脂翻转缺陷。Scott综合征患者的血小板不能在活化时暴露磷脂酰丝氨酸（PS），从而影响血小板的凝血功能。此外，Ano6还参与调节ADAM17（一种重要的金属蛋白酶）的切割活性，进而影响细胞因子和生长因子的释放[1,2,4,6]。
除了在血小板功能中的作用外，Ano6还在骨骼肌细胞中发挥作用。研究表明，Ano6在C2C12成肌细胞中高表达，并参与调节成肌细胞的增殖。Ano6的敲低导致C2C12成肌细胞增殖减少，而对其分化没有影响。此外，Ano6的缺失还显著降低了ERK/AKT磷酸化水平，这表明Ano6可能通过调节ERK/AKT信号通路来影响成肌细胞的增殖[3]。
Ano6还在巨噬细胞的先天免疫应答中发挥作用。研究表明，Ano6在巨噬细胞中被P2X7受体激活，并通过其Ca2+依赖性磷脂翻转酶活性和Ca2+激活的氯离子通道活性参与免疫防御。Ano6的抑制或敲低减弱了ATP诱导的细胞收缩、细胞迁移和磷脂翻转。在Ano6基因敲除小鼠的巨噬细胞中，P2X7受体激活引起的膜起泡和凋亡显著减少。此外，Ano6还支持巨噬细胞对细菌的吞噬和杀伤作用[5]。
综上所述，Ano6是一种多功能蛋白，在血小板功能、骨骼肌细胞增殖和巨噬细胞的先天免疫应答中发挥着重要作用。Ano6的缺陷与多种疾病相关，包括Scott综合征和免疫功能障碍。进一步研究Ano6的功能和作用机制，有助于深入理解其在生理和病理过程中的作用，并为相关疾病的治疗提供新的思路和策略。
参考文献：
1. Millington-Burgess, Sarah L, Harper, Matthew T. 2019. Gene of the issue: ANO6 and Scott Syndrome. In Platelets, 31, 964-967. doi:10.1080/09537104.2019.1693039. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31746257/
2. Veit, Martin, Koyro, Katharina Isabelle, Ahrens, Björn, Bhakdi, Sucharit, Reiss, Karina. 2018. Anoctamin-6 regulates ADAM sheddase function. In Biochimica et biophysica acta. Molecular cell research, 1865, 1598-1610. doi:10.1016/j.bbamcr.2018.08.011. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30327201/
3. Zhao, Piming, Torcaso, Audrey, Mariano, Andrew, Zhao, Lixia, Han, Renzhi. 2014. Anoctamin 6 regulates C2C12 myoblast proliferation. In PloS one, 9, e92749. doi:10.1371/journal.pone.0092749. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24663380/
4. Montague, Samantha J, Price, Joshua, Pennycott, Katherine, Harrison, Paul, Morgan, Neil V. 2024. Comprehensive functional characterization of a novel ANO6 variant in a new patient with Scott syndrome. In Journal of thrombosis and haemostasis : JTH, 22, 2281-2293. doi:10.1016/j.jtha.2024.02.021. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38492852/
5. Ousingsawat, Jiraporn, Wanitchakool, Podchanart, Kmit, Arthur, Schreiber, Rainer, Kunzelmann, Karl. 2015. Anoctamin 6 mediates effects essential for innate immunity downstream of P2X7 receptors in macrophages. In Nature communications, 6, 6245. doi:10.1038/ncomms7245. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25651887/
6. Nurden, Paquita, Stritt, Simon, Favier, Remi, Nurden, Alan T. 2021. Inherited platelet diseases with normal platelet count: phenotypes, genotypes and diagnostic strategy. In Haematologica, 106, 337-350. doi:10.3324/haematol.2020.248153. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33147934/
