Cd69-KO 基因敲除小鼠

CD69，也称为激活诱导分子、非常早期激活抗原、MLR-3和Leu-23，是一种重要的细胞表面分子，属于自然杀伤（NK）细胞基因复合家族的信号转导受体。CD69是一种II型跨膜糖蛋白，其细胞外部分具有C型凝集素结合域。CD69的表达在多种造血细胞谱系中被诱导，包括T和B淋巴细胞、NK细胞、小鼠巨噬细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，而在人类单核细胞、血小板和表皮朗格汉斯细胞中则构成性表达。尽管尚未发现CD69的特异性配体，但其广泛细胞分布和在CD69交联诱导下产生细胞内信号表明，该受体在造血细胞生物学中发挥作用。此外，某些结果表明CD69可能与类风湿性关节炎、慢性炎症性肝病、轻度哮喘和获得性免疫缺陷综合症等疾病的发病机制有关。

CD69是一种膜结合的II型C-凝集素受体，是淋巴细胞激活的典型早期标记，因为它在刺激后在细胞膜表面迅速出现。CD69在组织驻留免疫细胞的不同亚群中表达，包括驻留记忆T（TRM）细胞和γδ T细胞，因此被认为是组织保留的标记。最近的证据表明，CD69调节了某些T细胞亚群的特殊功能，决定了迁移-保留比率以及获得效应或调节表型。具体来说，CD69调节调节性T（Treg）细胞的分化以及IFN-γ、IL-17和IL-22的分泌。CD69配体的鉴定，如Galectin-1（Gal-1），表明CD69诱导的信号传导不仅发生在淋巴器官中T细胞与抗原呈递细胞之间的同源接触期间，还发生在周围组织中，其中细胞因子和其他代谢物控制免疫反应的最终结果。这里将讨论CD69介导的分子信号传导的新方面以及它在调节TH效应子谱系代谢重编程中的作用[1]。

越来越多的证据表明，T细胞在心肌梗死（MI）后控制免疫稳态和发病机制中起着重要作用，尽管其潜在的分子机制仍然难以捉摸。在一项研究中，对283名患者进行了广泛的免疫标记分析，发现MI后Tregs上显著过度表达CD69。小鼠实验结果显示，Tregs上的CD69表达增加了LAD冠状动脉结扎后的存活率。Cd69-/-小鼠在缺血后发展出强烈的IL-17+ γδT细胞反应，这增加了心肌炎症，从而恶化了心脏功能。CD69+ Tregs通过诱导AhR依赖性CD39核苷酸酶活性，导致γδT细胞凋亡并减少IL-17A的产生。将CD69+ Tregs转移到Cd69-/-小鼠中，在LAD结扎后减少了IL-17+ γδT细胞的募集，从而增加了存活率。一致地，来自2个独立患者队列的临床数据表明，急性MI后外周血细胞中CD69表达的升高与2.5年后因心力衰竭（HF）再次住院的风险较低相关。在调整年龄、性别和传统心脏损伤生物标志物后，这一结果仍然显著。这些数据突出了Tregs上CD69表达作为MI后HF的潜在预后因素和治疗选择[2]。

CD69是一种早期白细胞激活标记，参与调节免疫反应。最初，使用单克隆抗体进行体外研究来评估其功能，直到开发出敲除小鼠。随后，已经确定了CD69的四种配体，即半乳糖凝集素-1、S100A8/S100A9复合物、肌轻链9和12以及氧化低密度脂蛋白。此外，还发现了一些与CD69侧向相关并受其调节的分子，包括钙网蛋白和两种跨膜受体，即鞘氨醇-1-磷酸受体（S1P1）和异源二聚体氨基酸转运蛋白复合物SLC7A5-SLC3A2（LAT1-CD98）。最近，CD69的结合已被证明可以诱导T细胞中免疫调节受体程序性细胞死亡-1（PD-1）的表达。在不同的场景和细胞类型中探索了CD69诱导的分子信号传导。本综述提供了关于已知受CD69调节的分子途径、配体和细胞功能的视角[3]。

免疫疗法利用攻击肿瘤的T细胞是一种有前景的治疗策略，但免疫抑制性T细胞亚群，如调节性T细胞（Treg）和免疫检查点分子，包括程序性死亡-1（PD-1），可以抑制T细胞免疫反应的强度，从而损害肿瘤清除。已知CD69是一种早期白细胞激活标记，可以用作T细胞激活的度量或早期标记。近年来，CD69在调节Treg/Th17（T辅助细胞17）分化和T细胞组织保留中的作用引起了广泛关注。这些功能与CD69在肿瘤微环境（TME）中免疫抑制的作用相关。本综述首先总结了当前对CD69生物学功能的观点，并证明CD69作为T细胞激活、分化、保留和衰竭的调节因子发挥作用。然后，我们讨论了对CD69缺乏和抗CD69抗体给药的理解的最新进展，并揭示了针对CD69进行癌症免疫治疗和预后预测的价值[4]。

自身免疫性疾病是免疫系统维持耐受性受损的结果，导致炎症反应过度，从而造成组织损伤。在正常情况下，适应性免疫系统中的细胞受到高度控制，以保持对自身抗原（自身Ag）的无反应性，这通过多种机制在不同成熟阶段实现。CD69（簇状分化69），一种C型凝集素二硫键连接的同源二聚体，在多种白细胞上表达，包括新激活的淋巴细胞、某些亚型的记忆T细胞、从慢性炎症性疾病患者分离的浸润淋巴细胞以及调节性T细胞（Tregs）。来自体外和体内研究的累积证据揭示了CD69的免疫调节作用。该标记物已被报道在慢性人类炎症性疾病中发挥作用。许多研究表明，CD69的缺失与炎症和/或自身免疫状况的易感性相关，这表明CD69通过控制Th/Treg细胞的分化和增强Tregs的抑制活性等机制发挥免疫调节功能。然而，来自人类研究的一些报告表明，CD69可能对炎症反应具有刺激作用。本综述首先简要总结了“免疫耐受”的概念，然后回顾了先前的研究，以揭示CD69免疫调节作用的细节[5]。

调节性T细胞（Tregs）对于产生和维持外周耐受至关重要。基于Tregs的免疫疗法对于临床管理由免疫耐受失调引起的疾病很有价值。然而，缺乏效力是Tregs疗法的潜在局限性。此外，CD69阳性-Treg（CD69+ Treg）代表了一组新发现的Tregs，具有强大的免疫抑制能力。在研究中，通过Foxp3 YFP-Cre CD69 fl/fl和CD4 Cre CD69 fl/fl小鼠确定了CD69与Treg的相关性。通过染色质免疫沉淀测定（ChIP）和荧光素酶测定检测了热休克转录因子1（HSF1）对CD69转录的调控。通过蛋白质印迹和qRT-PCR测定基因表达。通过流式细胞术确定了幼稚T细胞分化为CD69+Foxp3+ iTregs。通过ELISA和流式细胞术分析了Tregs的免疫抑制能力。小鼠的结肠炎症通过体重和结肠长度的变化、疾病活动指数（DAI）以及结肠组织的H&E染色来反映。结果显示，来自CD4 Cre CD69 fl/fl小鼠的诱导Tregs（iTregs）未能缓解结肠炎。转录因子HSF1与CD69基因启动子相互作用，在Treg分化过程中促进其转录。HSF1的基因和化学抑制损害了CD69+ Treg的分化并促进了小鼠中结肠炎的发病机制。相反，通过抑制其蛋白酶体降解来稳定HSF1蛋白促进了CD69+ Treg的分化并减轻了小鼠的结肠炎。此外，通过蛋白酶体抑制剂（PSI）稳定HSF1的iTregs的过继转移显着防止了小鼠结肠炎的发展，并伴随着促炎细胞因子产生减少和结肠炎组织中促炎淋巴细胞积聚减少，而缺乏PSI诱导的Tregs则不太稳定且在抑制结肠炎方面无效。结论：HSF1通过激活CD69转录促进CD69+ Tregs的分化，这对于Tregs的免疫抑制功能至关重要。通过PSIs稳定HSF1导致高效生成Tregs，这些Tregs具有高效力，可用于治疗结肠炎和其他可能涉及Tregs缺乏的自身免疫性疾病[6]。

CD69是白细胞上的激活标记。早期研究显示，在哮喘和嗜酸性肺炎患者的肺中检测到CD69+细胞，表明CD69可能在这些炎症性疾病的发病机制中起重要作用，而不仅仅是激活标记。使用小鼠模型的深入研究已经阐明CD69是一种功能分子，调节免疫反应。研究人员发现肌轻链9、12a、12b（Myl9/12）是CD69的配体，并且血小板衍生的Myl9形成了一种在炎症肺中强烈检测到的网状结构（Myl9网）。CD69表达的活化T细胞可以附着在Myl9网上，通过称为CD69-Myl9系统的系统迁移到炎症组织中。本综述总结了CD69-Myl9系统的发现，并讨论了该系统在炎症免疫反应中的重要性。此外，研究人员最近发现CD69控制肿瘤浸润T细胞的耗竭状态，并且阻断CD69功能增强了抗肿瘤免疫力。最后，研究人员讨论了CD69作为难治性炎症性疾病和肿瘤患者的新治疗靶点的可能性[7]。

CD69与Sphingosine-1-磷酸受体1（S1PR1）相互作用，S1PR1由S1P激活，促进淋巴细胞从淋巴器官的逸出，这是免疫监测和T细胞效应活动的一个关键过程。多种抑制S1PR1功能的药物已用于治疗自身免疫性疾病。CD69是淋巴细胞逸出的内源性负调节因子，它与S1PR1相互作用，以顺式促进受体的内化和降解。CD69导致S1PR1内化的机制尚不清楚。此外，尽管有许多与不同小分子激动剂结合的A类GPCR结构已确定，但尚不清楚跨膜蛋白本身是否可以作为A类GPCR的激动剂。在这里，研究人员展示了CD69结合的S1PR1与异源三聚体Gi复合物耦合的冷冻电子断层扫描结构。CD69同源二聚体一个原体中的跨膜螺旋（TM）与S1PR1-TM4接触。这种相互作用变构地诱导S1PR1-TMs 5-6的运动，直接激活受体以与异源三聚体Gi结合。界面处关键残基的突变影响了CD69和S1PR1之间的相互作用，以及降低了受体内化。因此，结构发现与功能分析表明，CD69作为S1PR1的蛋白质激动剂，促进Gi依赖的S1PR1内化，S1P梯度感知的丧失，以及淋巴细胞逸出的抑制[8]。

CD69在病毒感染期间在白细胞表面高度表达，并且已经使用CD69-/-小鼠最近证明了CD69在牛痘病毒（VACV）免疫反应中的调节作用。研究表明，使用抗人CD69单克隆抗体（MAb）2.8作为预防性和治疗性治疗，可以增强表达人CD69的小鼠对VACV感染的控制。这种控制与周围NK细胞反应的增加以及周围产生细胞因子的T和NK细胞数量的增加有关。此外，在用抗鼠CD69 MAb 2.2治疗的免疫能力正常野生型（WT）小鼠和免疫缺陷Rag2-/- CD69+/+小鼠中，无论在长时间还是短时间内，都复制了类似的免疫力和对VACV的保护。这种结果并非由于感染和抗CD69治疗的协同作用，因为在没有感染的情况下，抗人CD69靶向诱导免疫激活，其特征是免疫细胞的动员、增殖和增强的存活率以及免疫细胞产生的几种先天促炎细胞因子的大量产生。此外，研究人员表明，抗CD69 MAb治疗引起的快速白细胞效应部分依赖于mTOR信号传导。这些特性表明，CD69靶向疗法作为抗病毒佐剂，以预防继发性感染具有潜在的治疗价值。在这些研究中，研究人员证明了人类和鼠抗CD69疗法对VACV感染免疫反应的影响。研究人员报告说，靶向CD69增加了感染期间二级淋巴器官中的白细胞数量，并提高了清除病毒感染的能力。靶向CD69增加了产生γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的NK和T细胞数量。在表达人CD69的小鼠中，用抗CD69 MAb治疗会产生细胞因子产生、存活和增殖的增加，部分通过mTOR信号传导介导。这些结果，以及研究人员主要使用人CD69转基因模型的事实，揭示了CD69作为增强疫苗保护性的治疗靶点的潜力[9]。

CD69，也称为激活诱导分子、非常早期激活抗原、MLR-3和Leu-23，是一种重要的细胞表面分子，属于自然杀伤（NK）细胞基因复合家族的信号转导受体。CD69是一种II型跨膜糖蛋白，其细胞外部分具有C型凝集素结合域。CD69的表达在多种造血细胞谱系中被诱导，包括T和B淋巴细胞、NK细胞、小鼠巨噬细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，而在人类单核细胞、血小板和表皮朗格汉斯细胞中则构成性表达。尽管尚未发现CD69的特异性配体，但其广泛细胞分布和在CD69交联诱导下产生细胞内信号表明，该受体在造血细胞生物学中发挥作用。此外，某些结果表明CD69可能与类风湿性关节炎、慢性炎症性肝病、轻度哮喘和获得性免疫缺陷综合症等疾病的发病机制有关[10]。

综上所述，CD69是一种重要的细胞表面分子，在淋巴细胞激活和免疫反应调节中发挥着关键作用。CD69不仅在组织驻留和免疫细胞功能中发挥着重要作用，还与多种疾病的发病机制相关。CD69的表达和功能研究为开发新的免疫治疗策略和预后预测工具提供了有价值的见解。