智鼠故事 
C57BL/6JCya-Rhobtb3em1flox/Cya 条件性基因敲除小鼠
复苏/繁育服务
产品名称：
Rhobtb3-flox
产品编号：
S-CKO-15667
品系背景：
C57BL/6JCya
* 使用本品系发表的文献需注明：Rhobtb3-flox mice (Strain S-CKO-15667) were purchased from Cyagen.
交付类型
周龄
性别
基因型
数量
只
基本信息
品系名称
C57BL/6JCya-Rhobtb3em1flox/Cya
品系编号
CKOCMP-73296-Rhobtb3-B6J-VA
产品编号
S-CKO-15667
基因名
Rhobtb3
品系背景
C57BL/6JCya
基因别称
mKIAA0878；1700040C17Rik；2610033K01Rik；4930503C18Rik
NCBI号
修饰方式
条件性基因敲除
品系说明
该品系是基于策略设计时的数据库信息制作而成，建议您在购买前查询最新的数据库和相关文献，以获取最准确的表型信息。
小鼠表型
MGI:1920546 Mice homozygous for a knock-out allele exhibit preweaning lethality, reduced body weight and slightly reduced organ weights that varies by sex.
质控标准
精子检测
① 冷冻前验证精子活力观察
② 冷冻验证每批次进行复苏验证
品系状态
活体
环境标准
SPF
供应地区
中国
品系详情
Rhobtb3位于小鼠的13号染色体，采用基因编辑技术，通过高通量电转受精卵方式，获得Rhobtb3基因条件性敲除小鼠，性成熟后取精子冻存。
Rhobtb3-flox小鼠模型是由赛业生物（Cyagen）采用基因编辑技术构建的条件性敲除小鼠。Rhobtb3基因位于小鼠13号染色体上，由12个外显子组成，其中ATG起始密码子在1号外显子，TGA终止密码子在12号外显子。条件性敲除区域（cKO区域）位于3号外显子，包含187个碱基对的编码序列。删除该区域会导致小鼠Rhobtb3基因功能的丧失。
Rhobtb3-flox小鼠模型的构建过程包括使用BAC克隆RP23-404N6作为模板，通过PCR扩增同源臂和cKO区域，构建靶向载体。随后，将核糖核蛋白（RNP）和靶向载体共同注入受精卵。出生后的小鼠通过PCR和测序分析进行基因型鉴定。
携带敲除等位基因的小鼠表现出出生前死亡、体重减轻以及略微减少的器官重量，这些现象因性别而异。此外，敲除3号外显子会导致基因移码，并覆盖编码区的10.2%。5'-loxP位点插入的内含子2大小为3568 bp，3'-loxP位点插入的内含子3大小为21604 bp。有效的cKO区域大小约为1.5 kb。cKO区域没有其他已知基因的存在。
该模型可用于研究Rhobtb3基因在小鼠体内的功能，为进一步研究相关生物学过程提供重要的工具。
基因研究概述
RhoBTB3是一种非典型的Rho GTPase，属于Rho GTPase家族成员，在哺乳动物中存在三个同源物：RhoBTB1、RhoBTB2和RhoBTB3。Rho GTPases在细胞骨架调节中发挥重要作用，而RhoBTB亚家族成员具有一个独特的羧基末端扩展，包含两个BTB结构域，能够组装cullin 3依赖性泛素连接酶复合物。RhoBTB蛋白在多种生理和病理过程中发挥作用，包括细胞骨架调节、细胞周期控制、细胞凋亡、囊泡运输和肿瘤发生。
RhoBTB3在囊泡运输中发挥重要作用。研究发现，RhoBTB3直接与Rab9 GTPase结合，并与其协同作用，将蛋白质从内体转运到高尔基体。RhoBTB3在培养细胞中的功能需要其N端的Rho相关结构域和C端与Rab9相互作用的重要序列。生物化学分析表明，RhoBTB3结合并水解ATP而不是GTP。Rab9结合打开自抑制的RhoBTB3蛋白，允许最大ATP水解。由于RhoBTB3与TIP47在膜上相互作用，因此提出它可能发挥作用，将货物选择蛋白从囊泡中释放，以允许它们在Golgi处有效地对接和融合[3]。
RhoBTB3在细胞周期控制中也发挥重要作用。研究发现，RhoBTB3在细胞周期S/G2转换中发挥作用，通过将细胞周期蛋白E靶向泛素化。RhoBTB3缺乏导致细胞在S期停滞，高尔基体碎片化，并增加细胞周期蛋白E水平。在Golgi上，RhoBTB3作为Cullin3（CUL3）依赖性RING-E3泛素连接酶复合物的一部分与细胞周期蛋白E结合，该复合物由RhoBTB3、CUL3和RBX1组成。该复合物在高尔基体的结合对于其催化细胞周期蛋白E泛素化和允许正常细胞周期进展的能力至关重要。这些实验揭示了一种Ras超家族成员在催化S期细胞周期蛋白E周转中的新作用，以及高尔基体作为细胞周期控制泛素化平台的一个意想不到的、基本的作用[6]。
RhoBTB3在肿瘤发生中也发挥作用。研究发现，RhoBTB3在乳腺癌组织中的mRNA水平显著上调，与邻近正常组织相比。此外，RhoBTB3表达与Col1a1表达相关。降低RhoBTB3表达可能导致乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力下降。进一步研究发现，在乳腺癌细胞中敲低Col1a1的表达限制了癌细胞的增殖和侵袭能力。敲低RhoBTB3可能通过抑制Col1a1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和转移，为乳腺癌治疗提供了一种新的治疗策略[1]。
RhoBTB3在急性髓系白血病（AML）中的表达模式和预后意义尚未被系统地研究。研究发现，在AML患者中，RhoBTB3的表达水平与预后相关。在化疗组中，RhoBTB3高表达水平的患者表现出相对较长的总生存期和无病生存期。多变量Cox分析表明，RhoBTB3 mRNA高表达是AML患者预后的独立有利因素。然而，在allo-HSCT组中，RhoBTB3高和低表达亚组之间在总生存期和无病生存期方面没有显著差异。同时，allo-HSCT可以克服与RhoBTB3下调相关的不利预后。功能富集分析表明，RhoBTB3表达与几个基本生理成分和通路相关，包括细胞外基质成分、细胞外结构组织和细胞因子-细胞因子受体相互作用。这些结果表明，RhoBTB3可能成为AML患者预后的生物标志物，并有助于选择化疗和allo-HSCT之间的适当治疗方案[2]。
RhoBTB3在肾细胞癌（RCC）中发挥重要作用。研究发现，RhoBTB3在RCC肿瘤组织中下调，而miR-142-3p在RCC肿瘤组织中上调。miR-142-3p与RhoBTB3的表达呈负相关。双荧光素酶报告基因检测证实了miR-142-3p与RhoBTB3的直接相互作用。miR-142-3p的过表达促进了异种移植模型中的转移，而miR-142-3p的抑制上调了RhoBTB3蛋白表达，并抑制了HIF1A、VEGFA和GGT1的mRNA和蛋白表达。miR-142-3p的过表达上调了HIF1A、VEGFA和GGT1的mRNA表达。这些结果表明，miR-142-3p作为RCC中的致癌基因，通过靶向RhoBTB3来调节HIF-1信号通路和GGT/GSH通路，需要进一步的研究[7]。
RhoBTB3与5-HT7a受体相互作用，并抑制其蛋白酶体降解。研究发现，RhoBTB3与5-HT7a受体的C端尾和第三内环直接相互作用。免疫荧光显微镜显示，5-HT7a受体和RhoBTB3在细胞膜和高尔基体中存在明显的共定位。尽管RhoBTB3已被证明与Cul3相互作用，而Cul3又与E3泛素连接酶Roc1相互作用，但研究发现，RhoBTB3既不招募Cul3/Roc1到5-HT7a受体，也不介导该受体的泛素化。相反，研究发现，RhoBTB3强烈抑制5-HT7a受体的蛋白酶体降解[5]。
RhoBTB3在小鼠中的表达分析表明，RhoBTB3在胚胎和成年小鼠中普遍表达，但在胚胎中的表达水平较高。在胚胎中，RhoBTB3在骨骼、软骨、所有类型的肌肉、睾丸和神经系统受限区域中表达水平较高。在成年小鼠中，RhoBTB3在心肌、血管中层和软骨中的表达水平较低，而在睾丸中表达水平较高。基因敲除小鼠的研究表明，RhoBTB3基因敲除导致小鼠的存活率降低、出生后生长缺陷和睾丸体积减小[4]。
综上所述，RhoBTB3是一种非典型的Rho GTPase，在囊泡运输、细胞周期控制和肿瘤发生中发挥重要作用。RhoBTB3与Rab9 GTPase协同作用，将蛋白质从内体转运到高尔基体。RhoBTB3在细胞周期S/G2转换中发挥作用，通过将细胞周期蛋白E靶向泛素化。RhoBTB3在乳腺癌、AML和RCC中发挥重要作用，可能成为这些疾病的预后生物标志物和治疗靶点。RhoBTB3与5-HT7a受体相互作用，并抑制其蛋白酶体降解。RhoBTB3在小鼠中的表达分析表明，它在胚胎和成年小鼠中普遍表达，但在胚胎中的表达水平较高。RhoBTB3的研究有助于深入理解其在生理和病理过程中的作用，为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和策略。
参考文献：
1. Kim, Kyungho, Kim, Youn-Jae. 2022. RhoBTB3 Regulates Proliferation and Invasion of Breast Cancer Cells via Col1a1. In Molecules and cells, 45, 631-639. doi:10.14348/molcells.2022.2037. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35698915/
2. Yang, Shuang-Hui, Liu, Wei, Peng, Jie, Chen, Cong, Liu, En-Yi. 2021. High Expression of RhoBTB3 Predicts Favorable Chemothrapy Outcomes in non-M3 Acute Myeloid Leukemia. In Journal of Cancer, 12, 4229-4239. doi:10.7150/jca.50472. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34093823/
3. Espinosa, Eric J, Calero, Monica, Sridevi, Khambhampaty, Pfeffer, Suzanne R. . RhoBTB3: a Rho GTPase-family ATPase required for endosome to Golgi transport. In Cell, 137, 938-48. doi:10.1016/j.cell.2009.03.043. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19490898/
4. Lutz, Julia, Grimm-Günter, Eva-Maria S, Joshi, Pooja, Rivero, Francisco. 2014. Expression analysis of mouse Rhobtb3 using a LacZ reporter and preliminary characterization of a knockout strain. In Histochemistry and cell biology, 142, 511-28. doi:10.1007/s00418-014-1235-9. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24923387/
5. Matthys, Anne, Van Craenenbroeck, Kathleen, Lintermans, Béatrice, Haegeman, Guy, Vanhoenacker, Peter. 2012. RhoBTB3 interacts with the 5-HT7a receptor and inhibits its proteasomal degradation. In Cellular signalling, 24, 1053-63. doi:10.1016/j.cellsig.2011.12.027. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22245496/
6. Lu, Albert, Pfeffer, Suzanne R. 2013. Golgi-associated RhoBTB3 targets cyclin E for ubiquitylation and promotes cell cycle progression. In The Journal of cell biology, 203, 233-50. doi:10.1083/jcb.201305158. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24145166/
7. Zhang, Yijing, Ma, Sha, Zhang, Jun, Cao, Xiliang, Wei, Jin. 2023. MicroRNA-142-3p promotes renal cell carcinoma progression by targeting RhoBTB3 to regulate HIF-1 signaling and GGT/GSH pathways. In Scientific reports, 13, 5935. doi:10.1038/s41598-022-21447-2. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37045834/
