智鼠故事 
C57BL/6JCya-Themisem1flox/Cya 条件性基因敲除小鼠
复苏/繁育服务
产品名称：
Themis-flox
产品编号：
S-CKO-05546
品系背景：
C57BL/6JCya
* 使用本品系发表的文献需注明：Themis-flox mice (Strain S-CKO-05546) were purchased from Cyagen.
交付类型
周龄
性别
基因型
数量
只
基本信息
品系名称
C57BL/6JCya-Themisem1flox/Cya
品系编号
CKOCMP-210757-Themis-B6J-VA
产品编号
S-CKO-05546
基因名
Themis
品系背景
C57BL/6JCya
基因别称
Gasp；Spot；Tsepa；thylex；E430004N04Rik
NCBI号
修饰方式
条件性基因敲除
品系说明
该品系是基于策略设计时的数据库信息制作而成，建议您在购买前查询最新的数据库和相关文献，以获取最准确的表型信息。
小鼠表型
MGI:2443552 Homozygous null mice have defects in T cell positive selection that leads to very few alpha-beta T cells being found in the periphery.
质控标准
精子检测
① 冷冻前验证精子活力观察
② 冷冻验证每批次进行复苏验证
品系状态
活体
环境标准
SPF
供应地区
中国
品系详情
Themis位于小鼠的10号染色体，采用基因编辑技术，通过高通量电转受精卵方式，获得Themis基因条件性敲除小鼠，性成熟后取精子冻存。
Themis-flox小鼠模型是由赛业生物（Cyagen）采用基因编辑技术构建的条件性敲除小鼠。Themis基因位于小鼠10号染色体上，由6个外显子组成，其中ATG起始密码子在1号外显子，TGA终止密码子在5号外显子。条件性敲除区域（cKO区域）位于4号外显子，包含1052个碱基对的编码序列。删除该区域会导致小鼠Themis基因功能的丧失。Themis-flox小鼠模型的构建过程包括使用BAC克隆RP23-464B12作为模板，通过PCR技术生成同源臂和cKO区域，并将它们插入到靶向载体中。随后，将核糖核蛋白（RNP）和靶向载体共同注入受精卵。出生的小鼠将进行PCR和测序分析进行基因型鉴定。此外，敲除4号外显子会导致基因移码，覆盖了编码区域的55.14%。5'-loxP位点的插入发生在第三个内含子，大小为20077个碱基对，而3'-loxP位点的插入发生在第四个内含子，大小为80557个碱基对。有效的cKO区域大小约为2.6千碱基对。赛业生物（Cyagen）的专家指出，由于生物过程的复杂性，现有的技术无法预测loxP插入对基因转录、RNA剪接和蛋白质翻译的风险。Themis-flox小鼠模型可用于研究Themis基因在小鼠体内的功能，特别是T细胞阳性选择缺陷导致的α-β T细胞在周围组织中的数量减少。
基因研究概述
Themis基因是T细胞系限制性蛋白家族的创始成员，属于一个大型真核生物蛋白家族。Themis基因在胸腺细胞正选择过程中发挥关键作用，与T细胞抗原受体（TCR）下游的信号传导相关。Themis基因的失活研究表明，它在胸腺细胞正选择过程中至关重要，但Themis功能的分子机制尚未完全阐明。
Themis基因位于人类染色体6p22.33上，编码一个含有串联重复的独特球状结构域（称为"CABIT"）的蛋白质，该结构域包括一个定义了五个未表征脊椎动物蛋白质家族的半胱氨酸基序。Themis基因的缺陷导致胸腺细胞在正选择过程中的基因表达改变，涉及细胞周期和生存相关基因的表达。这表明Themis基因在维持正选择过程中具有独特功能[2]。
Themis基因在免疫系统的发育和功能中发挥重要作用。Themis基因的缺失导致T细胞成熟缺陷，从双阳性（DP）到CD4单阳性（SP）细胞的成熟过程受损。此外，Themis基因的缺失还与T细胞激活、效应功能和代谢相关。在Themis基因缺失的动物模型中，T细胞的增殖、效应功能（包括抗肿瘤杀伤）和能量代谢的上调受到严重损害[1]。
Themis基因的功能与TCR信号传导有关。研究表明，Themis基因可以增强TCR信号传导，使胸腺细胞能够达到正选择的阈值，避免因缺乏关注而死亡。Themis基因的缺失导致TCR信号传导受损，影响T细胞的激活和效应功能[3]。
Themis基因的表达和稳定性受到多种因素的调控。研究表明，TCR介导的信号传导可以增强Themis蛋白的稳定性。TCR与TCR复合物（TCR-CD3）结合后，USP9X通过去除Themis蛋白上的泛素K48连接链，维持其稳定性。此外，Grb2蛋白可以介导USP9X与LAT的结合，进一步稳定Themis蛋白的表达[5]。
Themis基因的变异与多种免疫相关疾病有关。研究发现，Themis基因的变异与自身免疫性疾病（如炎症性肠病和自身免疫性脑脊髓炎）的发生有关。此外，Themis基因的变异还与肺结核的易感性降低有关[4]。
综上所述，Themis基因在免疫系统的发育和功能中发挥重要作用。Themis基因的缺失导致T细胞成熟缺陷，影响T细胞的激活和效应功能。Themis基因的表达和稳定性受到TCR介导的信号传导的调控。Themis基因的变异与多种免疫相关疾病有关。进一步研究Themis基因的功能和调控机制，有助于深入理解免疫系统的发育和功能，为免疫相关疾病的治疗和预防提供新的思路和策略。
参考文献：
1. Gautam, Namrata, Wojciech, Lukasz, Yap, Jiawei, Brzostek, Joanna, Gascoigne, Nicholas Rj. 2023. Themis controls T cell activation, effector functions, and metabolism of peripheral CD8+ T cells. In Life science alliance, 6, . doi:10.26508/lsa.202302156. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37739454/
2. Johnson, Andy L, Aravind, L, Shulzhenko, Natalia, Cornall, Richard J, Schwartz, Ronald H. 2009. Themis is a member of a new metazoan gene family and is required for the completion of thymocyte positive selection. In Nature immunology, 10, 831-9. doi:10.1038/ni.1769. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19597497/
3. Yang, Cui, Blaize, Gaëtan, Marrocco, Rémi, Saoudi, Abdelhadi, Lesourne, Renaud. 2022. THEMIS enhances the magnitude of normal and neuroinflammatory type 1 immune responses by promoting TCR-independent signals. In Science signaling, 15, eabl5343. doi:10.1126/scisignal.abl5343. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35857631/
4. Torre, Sabrina, Faucher, Sebastien P, Fodil, Nassima, Vidal, Silvia M, Gros, Philippe. 2014. THEMIS is required for pathogenesis of cerebral malaria and protection against pulmonary tuberculosis. In Infection and immunity, 83, 759-68. doi:10.1128/IAI.02586-14. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25452553/
5. Garreau, Anne, Blaize, Gaëtan, Argenty, Jérémy, Saoudi, Abdelhadi, Lesourne, Renaud. 2017. Grb2-Mediated Recruitment of USP9X to LAT Enhances Themis Stability following Thymic Selection. In Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950), 199, 2758-2766. doi:10.4049/jimmunol.1700566. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28877990/
