智鼠故事 
C57BL/6JCya-Ruvbl2em1flox/Cya 条件性基因敲除小鼠
复苏/繁育服务
产品名称：
Ruvbl2-flox
产品编号：
S-CKO-04884
品系背景：
C57BL/6JCya
* 使用本品系发表的文献需注明：Ruvbl2-flox mice (Strain S-CKO-04884) were purchased from Cyagen.
交付类型
周龄
性别
基因型
数量
只
基本信息
品系名称
C57BL/6JCya-Ruvbl2em1flox/Cya
品系编号
CKOCMP-20174-Ruvbl2-B6J-VA
产品编号
S-CKO-04884
基因名
Ruvbl2
品系背景
C57BL/6JCya
基因别称
p47；mp47
NCBI号
修饰方式
条件性基因敲除
品系说明
该品系是基于策略设计时的数据库信息制作而成，建议您在购买前查询最新的数据库和相关文献，以获取最准确的表型信息。
小鼠表型
MGI:1342299 Mice homozygous for a knock-out allele show complete embryonic lethality by E7.5. In vitro, blastocysts hatch from the zona pellucida but form irregular outgrowths with a poorly defined inner cell mass colony.
质控标准
精子检测
① 冷冻前验证精子活力观察
② 冷冻验证每批次进行复苏验证
品系状态
活体
环境标准
SPF
供应地区
中国
品系详情
Ruvbl2位于小鼠的7号染色体，采用基因编辑技术，通过高通量电转受精卵方式，获得Ruvbl2基因条件性敲除小鼠，性成熟后取精子冻存。
Ruvbl2-flox小鼠模型是由赛业生物（Cyagen）利用基因编辑技术构建的条件性敲除小鼠。Ruvbl2基因位于小鼠7号染色体上，由15个外显子组成，其中ATG起始密码子在1号外显子，TGA终止密码子在15号外显子。条件性敲除区域（cKO区域）位于第二号到4号外显子，包含253个碱基对的编码序列。删除该区域会导致小鼠Ruvbl2基因功能的丧失。
Ruvbl2-flox小鼠模型的构建过程包括将同源臂和cKO区域通过PCR技术从BAC克隆RP24-68H17中扩增出来，然后构建靶向载体。将核糖核蛋白（RNP）和靶向载体共同注入受精卵，从而产生Ruvbl2-flox小鼠。随后，对出生的小鼠进行PCR和测序分析进行基因型鉴定。
携带敲除等位基因的纯合子小鼠表现出致死性，而杂合子小鼠则表现出T细胞发育受损和最大化的T依赖性抗体反应。此外，敲除第二号到4号外显子会导致基因的移码，并覆盖了18.21%的编码区域。5'-loxP位点插入的内含子1大小为2877 bp，3'-loxP位点插入的内含子4大小为671 bp。有效的cKO区域大小约为2.9 kb。该策略是基于现有数据库中的遗传信息设计的。由于生物过程的复杂性，所有loxP插入对基因转录、RNA剪接和蛋白质翻译的影响风险，在现有技术层面无法预测。转录本Ruvbl2-202和Ruvbl2-203可能不会受到该cKO区域删除的影响。
Ruvbl2-flox小鼠模型可用于研究Ruvbl2基因在小鼠体内的功能。
基因研究概述
Ruvbl2，也称为TIP49b或RuvB-like protein 2，是一种ATP酶，属于AAA+（ATPase associated with diverse cellular activities）超家族。Ruvbl2在多种细胞过程中发挥着重要作用，包括DNA修复、转录调控、染色质重塑和信号传导等。Ruvbl2与Ruvbl1形成异源六聚体环状结构，参与多种大分子复合物的组装，如INO80、SWR1和R2TP等。
Ruvbl2在DNA修复过程中起着重要作用。细菌DNA解旋酶RuvB蛋白是同源重组和DNA双链断裂修复的关键组成部分。研究发现，Ruvbl2是人类RuvB基因的第二个假定的同源物，与Ruvbl1蛋白有43%的相似性。Ruvbl2基因包含15个外显子和14个内含子，编码一个由463个氨基酸组成的蛋白质。Ruvbl2基因与人类CGB/LHB基因簇在19号染色体上的19q13.3区域物理相连。Ruvbl2在所有被检测的人类组织中普遍表达，在睾丸中表达更为强烈。Ruvbl2基因在染色体区域频繁扩增的乳腺癌中具有潜在的作用[2]。
Ruvbl2在转录调控中也发挥着重要作用。研究发现，Ruvbl2与RNA聚合酶II（Pol II）和多种转录因子共同占据启动子区域。Ruvbl2与未磷酸化的Pol II在染色质中相互作用，促进RPB1羧基末端结构域（CTD）聚集和转录起始。Ruvbl2的快速耗竭导致Pol II簇的数量减少，并抑制新生RNA合成。此外，将Ruvbl2锚定到活性启动子可以增强Pol II在启动子区域的聚集。许多与Ruvbl2-Pol II轴直接相关的靶基因是癌症的标志，并编码具有多种细胞功能的蛋白质。这些结果表明，Ruvbl2在调节核中Pol II簇的形成方面具有新兴的活性[1]。
Ruvbl2在肿瘤发生中也发挥着重要作用。研究发现，Ruvbl1和Ruvbl2在胰腺导管腺癌（PDAC）中表达上调，并且是MYC驱动的癌症中可药物治疗的脆弱点。Ruvbl1/2复合物是MYC建立致癌和免疫逃逸基因表达所必需的。抑制Ruvbl1的表达导致PDAC细胞停滞，并导致小鼠肿瘤完全消退，这先于免疫细胞浸润。这些数据表明，Ruvbl1/2复合物在MYC驱动的癌症中具有重要的核功能，为胰腺癌的免疫治疗提供了新的策略[3]。
Ruvbl2还与m6A RNA修饰相关。研究发现，RUVBL1和RUVBL2在YTHDF1高表达的结直肠癌中表达上调，并且是患者不良预后的独立预测因子。RUVBL1/2的缺失优先损害了YTHDF1高表达的结直肠癌细胞的生长。YTHDF1和RUVBL1/2形成了一个正反馈回路，以加速致癌翻译。YTHDF1与m6A修饰的RUVBL1/2 mRNA结合，促进翻译起始和蛋白质表达。RUVBL1/2的耗竭导致YTHDF1驱动的致癌翻译和新生蛋白质生物合成的停滞，导致增殖停滞和细胞凋亡。这些发现表明，RUVBL1/2是YTHDF1高表达结直肠癌中潜在的治疗靶点，可以抑制m6A依赖性致癌翻译和克服m6A失调[4]。
Ruvbl2还参与其他重要的生物学过程。研究发现，DHX34，一种调节无义介导的mRNA降解（NMD）的RNA解旋酶，直接与RUVBL1-RUVBL2在体外和细胞中相互作用。冷冻电镜揭示了DHX34在RUVBL2复合物中的N-末端诱导了广泛的变化，稳定了一个不结合核苷酸并因此下调复合物ATP水解的构象。使用ATP酶缺陷突变体，发现DHX34专门作用于RUVBL2亚基。这表明DHX34通过将RUVBL1-RUVBL2 ATP酶活性与启动NMD反应所需的因子组装耦合起来来发挥作用[5]。
此外，Ruvbl2还与ARF转录调控有关。研究发现，Ruvbl2是ARF转录的新抑制因子。过表达Ruvbl2降低了ARF的水平，而敲低Ruvbl2导致ARF水平显著升高。Ruvbl2以ARF依赖性方式下调p53的水平。机制上，Ruvbl2与ARF启动子的远端区域结合，从而抑制ARF转录。这些结果表明，Ruvbl2在调节ARF-p53通路中发挥着重要作用[6]。
Ruvbl2还与脂肪细胞分化有关。研究发现，在3T3-L1细胞分化的第5-7天，PPARγ、RUVBL2和Adiponectin的表达同时显著增加。PPARγ过表达或PPARγ激活剂促进了Adiponectin的转运和分泌，并上调了RUVBL2表达和AS160磷酸化。相反，RUVBL2敲低降低了Adiponectin的分泌。此外，PPARγ显著增强了RUVBL2启动子活性。这些数据表明，PPARγ通过转录激活RUVBL2的表达来促进Adiponectin的表达、聚合和分泌，从而加速3T3-L1细胞分化[7]。
综上所述，Ruvbl2是一种重要的ATP酶，参与多种细胞过程，包括DNA修复、转录调控、染色质重塑和信号传导等。Ruvbl2在肿瘤发生、m6A RNA修饰、NMD、ARF转录调控和脂肪细胞分化等方面发挥着重要作用。Ruvbl2的研究有助于深入理解其生物学功能和疾病发生机制，为疾病的治疗和预防提供新的思路和策略。
参考文献：
1. Wang, Hui, Li, Boyuan, Zuo, Linyu, Deng, Wulan, Ji, Xiong. 2022. The transcriptional coactivator RUVBL2 regulates Pol II clustering with diverse transcription factors. In Nature communications, 13, 5703. doi:10.1038/s41467-022-33433-3. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36171202/
2. Parfait, B, Giovangrandi, Y, Asheuer, M, Vidaud, M, Bièche, I. . Human TIP49b/RUVBL2 gene: genomic structure, expression pattern, physical link to the human CGB/LHB gene cluster on chromosome 19q13.3. In Annales de genetique, 43, 69-74. doi:. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10998447/
3. Vogt, Markus, Dudvarski Stankovic, Nevenka, Cruz Garcia, Yiliam, Vos, Seychelle M, Wolf, Elmar. 2024. Targeting MYC effector functions in pancreatic cancer by inhibiting the ATPase RUVBL1/2. In Gut, 73, 1509-1528. doi:10.1136/gutjnl-2023-331519. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38821858/
4. Chen, Danyu, Ji, Fenfen, Zhou, Qiming, Yu, Jun, Wong, Chi Chun. . RUVBL1/2 Blockade Targets YTHDF1 Activity to Suppress m6A-Dependent Oncogenic Translation and Colorectal Tumorigenesis. In Cancer research, 84, 2856-2872. doi:10.1158/0008-5472.CAN-23-2081. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38900944/
5. López-Perrote, Andres, Hug, Nele, González-Corpas, Ana, Caceres, Javier F, Llorca, Oscar. 2020. Regulation of RUVBL1-RUVBL2 AAA-ATPases by the nonsense-mediated mRNA decay factor DHX34, as evidenced by Cryo-EM. In eLife, 9, . doi:10.7554/eLife.63042. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33205750/
6. Xie, Chongwei, Wang, Wenyu, Yang, Fan, Wu, Mian, Mei, Yide. 2012. RUVBL2 is a novel repressor of ARF transcription. In FEBS letters, 586, 435-41. doi:10.1016/j.febslet.2012.01.026. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22285491/
7. Zhu, Daiyun, Xu, Le, Wei, Xuan, Li, Qinjin, Chen, Xiaodong. 2020. PPARγ enhanced Adiponectin polymerization and trafficking by promoting RUVBL2 expression during adipogenic differentiation. In Gene, 764, 145100. doi:10.1016/j.gene.2020.145100. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32877748/
